植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2013年
5期
458-466
,共9页
邵宝林%刘瑶%朱天辉%李姝江
邵寶林%劉瑤%硃天輝%李姝江
소보림%류요%주천휘%리주강
猕猴桃%溃疡病%RAPD%特异引物%丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种
獼猴桃%潰瘍病%RAPD%特異引物%丁香假單胞桿菌獼猴桃緻病變種
미후도%궤양병%RAPD%특이인물%정향가단포간균미후도치병변충
kiwifruti%bacterial canker%RAPD%specific primers%Pseudomonas syringae pv.actinidiae
猕猴桃溃疡病是猕猴桃生产上的主要病害,为建立该病的快速诊断技术,本实验通过RAPD分析获得一条1 300 bp左右的致病菌的特异片段,对该片段进行克隆测序,在测序的基础上设计并合成一对特异引物F7/R7,优化特异引物扩增条件,并验证引物的特异性和灵敏性.利用该特异引物对包括猕猴桃溃疡病菌在内的14个菌株基因组DNA进行PCR扩增表明,只有猕猴桃溃疡病菌能扩增出1条约为950 bp的特异条带,其他菌株及对照均未扩增出特异条带.对采自果园的染病枝干组织和接种致病菌的枝干组织的检测表明,该特异引物能特异性地检测到猕猴桃溃疡病菌的存在,其在组织中的检测灵敏度为100 fg/μL.因此,利用设计合成的特异引物F7/R7,参考优化的体系和程序,结合简单的试剂盒法提取猕猴桃溃疡病菌或植物组织DNA,可以在短时间内完成对该病原菌的分子检测.
獼猴桃潰瘍病是獼猴桃生產上的主要病害,為建立該病的快速診斷技術,本實驗通過RAPD分析穫得一條1 300 bp左右的緻病菌的特異片段,對該片段進行剋隆測序,在測序的基礎上設計併閤成一對特異引物F7/R7,優化特異引物擴增條件,併驗證引物的特異性和靈敏性.利用該特異引物對包括獼猴桃潰瘍病菌在內的14箇菌株基因組DNA進行PCR擴增錶明,隻有獼猴桃潰瘍病菌能擴增齣1條約為950 bp的特異條帶,其他菌株及對照均未擴增齣特異條帶.對採自果園的染病枝榦組織和接種緻病菌的枝榦組織的檢測錶明,該特異引物能特異性地檢測到獼猴桃潰瘍病菌的存在,其在組織中的檢測靈敏度為100 fg/μL.因此,利用設計閤成的特異引物F7/R7,參攷優化的體繫和程序,結閤簡單的試劑盒法提取獼猴桃潰瘍病菌或植物組織DNA,可以在短時間內完成對該病原菌的分子檢測.
미후도궤양병시미후도생산상적주요병해,위건립해병적쾌속진단기술,본실험통과RAPD분석획득일조1 300 bp좌우적치병균적특이편단,대해편단진행극륭측서,재측서적기출상설계병합성일대특이인물F7/R7,우화특이인물확증조건,병험증인물적특이성화령민성.이용해특이인물대포괄미후도궤양병균재내적14개균주기인조DNA진행PCR확증표명,지유미후도궤양병균능확증출1조약위950 bp적특이조대,기타균주급대조균미확증출특이조대.대채자과완적염병지간조직화접충치병균적지간조직적검측표명,해특이인물능특이성지검측도미후도궤양병균적존재,기재조직중적검측령민도위100 fg/μL.인차,이용설계합성적특이인물F7/R7,삼고우화적체계화정서,결합간단적시제합법제취미후도궤양병균혹식물조직DNA,가이재단시간내완성대해병원균적분자검측.
