植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2013年
5期
449-457
,共9页
魏锋%余真真%商文静%杨家荣%徐向明%胡小平
魏鋒%餘真真%商文靜%楊傢榮%徐嚮明%鬍小平
위봉%여진진%상문정%양가영%서향명%호소평
大丽轮枝菌%微菌核%水筛法%实时荧光定量PCR%棉花黄萎病
大麗輪枝菌%微菌覈%水篩法%實時熒光定量PCR%棉花黃萎病
대려륜지균%미균핵%수사법%실시형광정량PCR%면화황위병
Verticillium dahliae%microsclerotia%wet-sieving%SYBR Green Ⅰ Real-time PCR%Verticillium wilt of cotton
微菌核是大丽轮枝菌在土壤中的主要存活结构和黄萎病的初侵染来源.对土壤中大丽轮枝菌微菌核进行定量是黄萎病监测和预警的基础.本研究以大丽轮枝菌Internal Transcribed Spacer (ITS)区特异性引物对P1/P2扩增产物的重组质粒为标准品,构建SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR反应的标准曲线,结合土样水筛法建立了土壤大丽轮枝菌微菌核定量检测体系.同时,建立了土壤中微菌核数量与棉花黄萎病发病率的关系模型.结果表明,实时定量PCR检测灵敏度比常规PCR高10倍,检测下限为1个微菌核/克土,在5.54×102 ~ 5.54×107copies范围内,DNA拷贝数的对数值与Ct值具有良好的线性关系.建立的土壤中微菌核个数n与Ct值之间的关系为n=e 7.3-Ct/3.905.温室人工接种微菌核数量与棉花黄萎病发病率间的线性关系为y =2.710n +0.251.
微菌覈是大麗輪枝菌在土壤中的主要存活結構和黃萎病的初侵染來源.對土壤中大麗輪枝菌微菌覈進行定量是黃萎病鑑測和預警的基礎.本研究以大麗輪枝菌Internal Transcribed Spacer (ITS)區特異性引物對P1/P2擴增產物的重組質粒為標準品,構建SYBR Green Ⅰ實時熒光定量PCR反應的標準麯線,結閤土樣水篩法建立瞭土壤大麗輪枝菌微菌覈定量檢測體繫.同時,建立瞭土壤中微菌覈數量與棉花黃萎病髮病率的關繫模型.結果錶明,實時定量PCR檢測靈敏度比常規PCR高10倍,檢測下限為1箇微菌覈/剋土,在5.54×102 ~ 5.54×107copies範圍內,DNA拷貝數的對數值與Ct值具有良好的線性關繫.建立的土壤中微菌覈箇數n與Ct值之間的關繫為n=e 7.3-Ct/3.905.溫室人工接種微菌覈數量與棉花黃萎病髮病率間的線性關繫為y =2.710n +0.251.
미균핵시대려륜지균재토양중적주요존활결구화황위병적초침염래원.대토양중대려륜지균미균핵진행정량시황위병감측화예경적기출.본연구이대려륜지균Internal Transcribed Spacer (ITS)구특이성인물대P1/P2확증산물적중조질립위표준품,구건SYBR Green Ⅰ실시형광정량PCR반응적표준곡선,결합토양수사법건립료토양대려륜지균미균핵정량검측체계.동시,건립료토양중미균핵수량여면화황위병발병솔적관계모형.결과표명,실시정량PCR검측령민도비상규PCR고10배,검측하한위1개미균핵/극토,재5.54×102 ~ 5.54×107copies범위내,DNA고패수적대수치여Ct치구유량호적선성관계.건립적토양중미균핵개수n여Ct치지간적관계위n=e 7.3-Ct/3.905.온실인공접충미균핵수량여면화황위병발병솔간적선성관계위y =2.710n +0.251.