植物病理学报
植物病理學報
식물병이학보
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA
2013年
5期
495-499
,共5页
施艳%袁媛%孙虎%古勤生%刘珊珊%王振跃
施豔%袁媛%孫虎%古勤生%劉珊珊%王振躍
시염%원원%손호%고근생%류산산%왕진약
瓜类褪绿黄化病毒%外壳蛋白基因%原核表达%抗血清
瓜類褪綠黃化病毒%外殼蛋白基因%原覈錶達%抗血清
과류퇴록황화병독%외각단백기인%원핵표체%항혈청
Cucurbit chlorotic yellows virus (CCYV)%coat protein gene%prokaryotic expression%antiserum
根据已报道的瓜类褪绿黄化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)外壳蛋白(CP)基因的核苷酸序列设计引物,利用RT-PCR方法从感病甜瓜中扩增得到长度为753 bp的CP基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3上,获得重组载体pGexCP,在大肠杆菌BL21菌株中诱导表达,SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21中得到了高效表达.以表达的蛋白为抗原,免疫家兔,制备了CCYV外壳蛋白的特异性抗血清.ACP-ELISA检测结果表明,当CP蛋白浓度为2.5μg/mL时,血清效价高达5.12×105.Westem blot分析表明制备的抗体检测CCYV侵染的甜瓜叶片得到特异性的条带,表明该抗体的特异性较好.ACP-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间甜瓜病样的检测.本试验为CCYV的快速检测提供了重要的研究材料.
根據已報道的瓜類褪綠黃化病毒(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)外殼蛋白(CP)基因的覈苷痠序列設計引物,利用RT-PCR方法從感病甜瓜中擴增得到長度為753 bp的CP基因,將其剋隆到原覈錶達載體pGEX-4T-3上,穫得重組載體pGexCP,在大腸桿菌BL21菌株中誘導錶達,SDS-PAGE分析錶明,經IPTG誘導,CP基因在大腸桿菌BL21中得到瞭高效錶達.以錶達的蛋白為抗原,免疫傢兔,製備瞭CCYV外殼蛋白的特異性抗血清.ACP-ELISA檢測結果錶明,噹CP蛋白濃度為2.5μg/mL時,血清效價高達5.12×105.Westem blot分析錶明製備的抗體檢測CCYV侵染的甜瓜葉片得到特異性的條帶,錶明該抗體的特異性較好.ACP-ELISA檢測結果錶明,製備的抗血清可用于田間甜瓜病樣的檢測.本試驗為CCYV的快速檢測提供瞭重要的研究材料.
근거이보도적과류퇴록황화병독(Cucurbit chlorotic yellows virus,CCYV)외각단백(CP)기인적핵감산서렬설계인물,이용RT-PCR방법종감병첨과중확증득도장도위753 bp적CP기인,장기극륭도원핵표체재체pGEX-4T-3상,획득중조재체pGexCP,재대장간균BL21균주중유도표체,SDS-PAGE분석표명,경IPTG유도,CP기인재대장간균BL21중득도료고효표체.이표체적단백위항원,면역가토,제비료CCYV외각단백적특이성항혈청.ACP-ELISA검측결과표명,당CP단백농도위2.5μg/mL시,혈청효개고체5.12×105.Westem blot분석표명제비적항체검측CCYV침염적첨과협편득도특이성적조대,표명해항체적특이성교호.ACP-ELISA검측결과표명,제비적항혈청가용우전간첨과병양적검측.본시험위CCYV적쾌속검측제공료중요적연구재료.
