草地学报
草地學報
초지학보
ACTA AGRESTIA SINICA
2013年
2期
379-387
,共9页
王慧敏%龙瑞才%沈益新%康俊梅%张铁军%张瑜%杨青川
王慧敏%龍瑞纔%瀋益新%康俊梅%張鐵軍%張瑜%楊青川
왕혜민%룡서재%침익신%강준매%장철군%장유%양청천
紫花苜蓿%RNA结合蛋白%实时定量RT-PCR%表达分析%烟草转化
紫花苜蓿%RNA結閤蛋白%實時定量RT-PCR%錶達分析%煙草轉化
자화목숙%RNA결합단백%실시정량RT-PCR%표체분석%연초전화
采用RACE技术以一段紫花苜蓿(Medicago sativa)盐诱导基因的EST(expressed sequence tag)序列为模板设计引物克隆此基因的全长序列.序列分析结果表明,该基因全长1551 bp,包含一个1230 bp的最大开放阅读框,编码409个氨基酸,包含3个RNA结合蛋白结构域(RRM domain),命名为MsRBP(GenBank accession No.JN986878.1).亚细胞定位分析表明此基因编码蛋白定位于细胞核.经同源比对和进化树分析,MsRBP基因编码的氨基酸序列与截形苜蓿(Medicago truncatula)、大豆(Gl ycine max)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)等物种中的某些RNA结合蛋白的氨基酸序列具有很高的相似性.RT-PCR (Real-time PCR)分析结果表明,在NaCl,ABA和PEG胁迫下MsRBP基因的表达水平均上调,推测该基因可能在紫花苜蓿逆境胁迫调控中发挥重要作用.经构建植物超表达载体pBI21-MsRBP,采用农杆菌介导法对烟草(Nicotiana tabacum)进行遗传转化,获得了抗性转化再生植株.通过PCR,RT-PCR及GUS组织化学染色分析表明:MsRBP基因在烟草的基因组中能够进行转录和表达.本研究为该基因的功能鉴定与调控机制研究奠定了基础.
採用RACE技術以一段紫花苜蓿(Medicago sativa)鹽誘導基因的EST(expressed sequence tag)序列為模闆設計引物剋隆此基因的全長序列.序列分析結果錶明,該基因全長1551 bp,包含一箇1230 bp的最大開放閱讀框,編碼409箇氨基痠,包含3箇RNA結閤蛋白結構域(RRM domain),命名為MsRBP(GenBank accession No.JN986878.1).亞細胞定位分析錶明此基因編碼蛋白定位于細胞覈.經同源比對和進化樹分析,MsRBP基因編碼的氨基痠序列與截形苜蓿(Medicago truncatula)、大豆(Gl ycine max)、擬南芥(Arabidopsis thaliana)等物種中的某些RNA結閤蛋白的氨基痠序列具有很高的相似性.RT-PCR (Real-time PCR)分析結果錶明,在NaCl,ABA和PEG脅迫下MsRBP基因的錶達水平均上調,推測該基因可能在紫花苜蓿逆境脅迫調控中髮揮重要作用.經構建植物超錶達載體pBI21-MsRBP,採用農桿菌介導法對煙草(Nicotiana tabacum)進行遺傳轉化,穫得瞭抗性轉化再生植株.通過PCR,RT-PCR及GUS組織化學染色分析錶明:MsRBP基因在煙草的基因組中能夠進行轉錄和錶達.本研究為該基因的功能鑒定與調控機製研究奠定瞭基礎.
채용RACE기술이일단자화목숙(Medicago sativa)염유도기인적EST(expressed sequence tag)서렬위모판설계인물극륭차기인적전장서렬.서렬분석결과표명,해기인전장1551 bp,포함일개1230 bp적최대개방열독광,편마409개안기산,포함3개RNA결합단백결구역(RRM domain),명명위MsRBP(GenBank accession No.JN986878.1).아세포정위분석표명차기인편마단백정위우세포핵.경동원비대화진화수분석,MsRBP기인편마적안기산서렬여절형목숙(Medicago truncatula)、대두(Gl ycine max)、의남개(Arabidopsis thaliana)등물충중적모사RNA결합단백적안기산서렬구유흔고적상사성.RT-PCR (Real-time PCR)분석결과표명,재NaCl,ABA화PEG협박하MsRBP기인적표체수평균상조,추측해기인가능재자화목숙역경협박조공중발휘중요작용.경구건식물초표체재체pBI21-MsRBP,채용농간균개도법대연초(Nicotiana tabacum)진행유전전화,획득료항성전화재생식주.통과PCR,RT-PCR급GUS조직화학염색분석표명:MsRBP기인재연초적기인조중능구진행전록화표체.본연구위해기인적공능감정여조공궤제연구전정료기출.
