中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2013年
19期
81-85
,共5页
刘莉%何湃%采克俊%张易祥%曹访%李景芬
劉莉%何湃%採剋俊%張易祥%曹訪%李景芬
류리%하배%채극준%장역상%조방%리경분
SSCs%MxA%慢病毒载体%移植%转基因精子%鸡
SSCs%MxA%慢病毒載體%移植%轉基因精子%鷄
SSCs%MxA%만병독재체%이식%전기인정자%계
本实验旨在探讨鸡精原干细胞(SSCs)经体外遗传修饰后移植获得转基因精子的方法.将人抗病毒基因MxA重组慢病毒体外感染鸡SSCs,获得可表达MxA的SSCs;同时将80日龄公鸡经白消安处理30 d后作为无生精能力的受体鸡.MxA基因转染后的SSCs移植到受体鸡,10d后开始采精,经PCR检测精液DNA中的MxA基因;取移植后10 d的睾丸组织分离培养并检测外源基因表达.结果表明:MxA重组慢病毒感染SSCs后,可见其特征性荧光表达;白消安处理后的受体鸡睾丸组织曲细精管中内源性生精细胞已基本去除;实验组有1只受体鸡的精液DNA连续4次扩增出MxA特异性片段;睾丸组织细胞的RT-PCR及免疫组化均检测到MxA基因的表达.结果显示,重组慢病毒感染后的SSCs能成功移植至受体组织,并继续分化为携带MxA外源基因的精子.本研究为下一步通过人工授精获得抗病毒转基因鸡奠定了良好基础.
本實驗旨在探討鷄精原榦細胞(SSCs)經體外遺傳脩飾後移植穫得轉基因精子的方法.將人抗病毒基因MxA重組慢病毒體外感染鷄SSCs,穫得可錶達MxA的SSCs;同時將80日齡公鷄經白消安處理30 d後作為無生精能力的受體鷄.MxA基因轉染後的SSCs移植到受體鷄,10d後開始採精,經PCR檢測精液DNA中的MxA基因;取移植後10 d的睪汍組織分離培養併檢測外源基因錶達.結果錶明:MxA重組慢病毒感染SSCs後,可見其特徵性熒光錶達;白消安處理後的受體鷄睪汍組織麯細精管中內源性生精細胞已基本去除;實驗組有1隻受體鷄的精液DNA連續4次擴增齣MxA特異性片段;睪汍組織細胞的RT-PCR及免疫組化均檢測到MxA基因的錶達.結果顯示,重組慢病毒感染後的SSCs能成功移植至受體組織,併繼續分化為攜帶MxA外源基因的精子.本研究為下一步通過人工授精穫得抗病毒轉基因鷄奠定瞭良好基礎.
본실험지재탐토계정원간세포(SSCs)경체외유전수식후이식획득전기인정자적방법.장인항병독기인MxA중조만병독체외감염계SSCs,획득가표체MxA적SSCs;동시장80일령공계경백소안처리30 d후작위무생정능력적수체계.MxA기인전염후적SSCs이식도수체계,10d후개시채정,경PCR검측정액DNA중적MxA기인;취이식후10 d적고환조직분리배양병검측외원기인표체.결과표명:MxA중조만병독감염SSCs후,가견기특정성형광표체;백소안처리후적수체계고환조직곡세정관중내원성생정세포이기본거제;실험조유1지수체계적정액DNA련속4차확증출MxA특이성편단;고환조직세포적RT-PCR급면역조화균검측도MxA기인적표체.결과현시,중조만병독감염후적SSCs능성공이식지수체조직,병계속분화위휴대MxA외원기인적정자.본연구위하일보통과인공수정획득항병독전기인계전정료량호기출.
