中国畜牧杂志
中國畜牧雜誌
중국축목잡지
CHINESE JOURNAL OF ANIMAL SCIENCE
2013年
17期
22-26
,共5页
郑蒙蒙%李伟%张亚妮%施青青%王丹%李碧春
鄭矇矇%李偉%張亞妮%施青青%王丹%李碧春
정몽몽%리위%장아니%시청청%왕단%리벽춘
胚胎干细胞%无饲养层培养体系%脂质体%优化转染%鸡
胚胎榦細胞%無飼養層培養體繫%脂質體%優化轉染%鷄
배태간세포%무사양층배양체계%지질체%우화전염%계
embryonic stem cells%feeder-free culture system%liposome%optimize transfection%chicken
鸡胚胎干细胞(cES)以其全能性,在研究胚胎发育生物学和家禽育种等方面有巨大的应用前景.本实验旨在建立cES无饲养层培养体系和对LipofactiminTM LTX(脂质体)介导转染体系进行优化.采用药匙法从新鲜受精蛋中分离获取cES,接种于层粘连蛋白包被的培养皿,待形成大克隆后,用口吸管剥离法吸取cES克隆进行消化传代,并采用生化和免疫学方法鉴定其干细胞活性.设计质粒量800、900、1 000ng 3个水平,质粒、脂质体比为1∶1.5、1∶2、1∶2.5体系转染cES.结果表明:无饲养层培养体系体外培养cES细胞能稳定传代至第6代,鉴定结果显示碱性磷酸酶阳性和阶段特异性胚胎抗原1阳性,指明克隆能保持未分化状态;质粒900 ng、质脂比为1∶2时,可获得最佳转染效率72％,为cES的脂质体介导外源基因的转染提供参考.
鷄胚胎榦細胞(cES)以其全能性,在研究胚胎髮育生物學和傢禽育種等方麵有巨大的應用前景.本實驗旨在建立cES無飼養層培養體繫和對LipofactiminTM LTX(脂質體)介導轉染體繫進行優化.採用藥匙法從新鮮受精蛋中分離穫取cES,接種于層粘連蛋白包被的培養皿,待形成大剋隆後,用口吸管剝離法吸取cES剋隆進行消化傳代,併採用生化和免疫學方法鑒定其榦細胞活性.設計質粒量800、900、1 000ng 3箇水平,質粒、脂質體比為1∶1.5、1∶2、1∶2.5體繫轉染cES.結果錶明:無飼養層培養體繫體外培養cES細胞能穩定傳代至第6代,鑒定結果顯示堿性燐痠酶暘性和階段特異性胚胎抗原1暘性,指明剋隆能保持未分化狀態;質粒900 ng、質脂比為1∶2時,可穫得最佳轉染效率72％,為cES的脂質體介導外源基因的轉染提供參攷.
계배태간세포(cES)이기전능성,재연구배태발육생물학화가금육충등방면유거대적응용전경.본실험지재건립cES무사양층배양체계화대LipofactiminTM LTX(지질체)개도전염체계진행우화.채용약시법종신선수정단중분리획취cES,접충우층점련단백포피적배양명,대형성대극륭후,용구흡관박리법흡취cES극륭진행소화전대,병채용생화화면역학방법감정기간세포활성.설계질립량800、900、1 000ng 3개수평,질립、지질체비위1∶1.5、1∶2、1∶2.5체계전염cES.결과표명:무사양층배양체계체외배양cES세포능은정전대지제6대,감정결과현시감성린산매양성화계단특이성배태항원1양성,지명극륭능보지미분화상태;질립900 ng、질지비위1∶2시,가획득최가전염효솔72％,위cES적지질체개도외원기인적전염제공삼고.
