高校化学工程学报
高校化學工程學報
고교화학공정학보
JOURNAL OF CHEMICAL ENGINEERING OF CHINESE UNIVERSITIES
2014年
2期
282-289
,共8页
房鑫%田思思%姚忠%王浩绮%周治%熊强%孙芸%韦萍
房鑫%田思思%姚忠%王浩綺%週治%熊彊%孫蕓%韋萍
방흠%전사사%요충%왕호기%주치%웅강%손예%위평
γ-谷氨酰转肽酶%重组%热失活%反应动力学%稳定性
γ-穀氨酰轉肽酶%重組%熱失活%反應動力學%穩定性
γ-곡안선전태매%중조%열실활%반응동역학%은정성
γ-glutamyltranspeptidase%recombination%thermal inactivation%kinetics%stability
γ-谷氨酰转肽酶(GGT)是生物体内谷氨酰循环的关键酶,在生物有机合成领域具有重要的应用价值.今建立了大肠杆菌和枯草芽孢杆菌GGT的克隆、重组及诱导表达方法.在此基础上,分别考察了重组大肠杆菌GGT(rE_GGT)和重组枯草芽孢杆菌GGT(rB_GGT)的催化特性和稳定性.结果表明,rE GGT对供体对硝基苯胺(GpNA)的亲和力(Km)优于rB GGT,但rB GGT的催化常数(Kcat)高达3.48×105 s-1,是rE_GGT的20倍.稳定性研究表明,rE GGT在pH 6～9和T＜45℃条件下的稳定性明显优于rB GGT;但当温度超过45℃时,rB GGT的稳定性更佳.通过对rE GGT和rB GGT的氨基酸组成及其大、小亚基界面相互作用力的分析表明,rE GGT大小亚基间疏水键的数目明显多于rB GGT,有助于稳定其四级结构,使其在中低温下具有良好的稳定性;而rB GGT氨基酸组成中荷电残基和芳香族残基的比例较高,可有效维持其二级结构的稳定性.
γ-穀氨酰轉肽酶(GGT)是生物體內穀氨酰循環的關鍵酶,在生物有機閤成領域具有重要的應用價值.今建立瞭大腸桿菌和枯草芽孢桿菌GGT的剋隆、重組及誘導錶達方法.在此基礎上,分彆攷察瞭重組大腸桿菌GGT(rE_GGT)和重組枯草芽孢桿菌GGT(rB_GGT)的催化特性和穩定性.結果錶明,rE GGT對供體對硝基苯胺(GpNA)的親和力(Km)優于rB GGT,但rB GGT的催化常數(Kcat)高達3.48×105 s-1,是rE_GGT的20倍.穩定性研究錶明,rE GGT在pH 6～9和T＜45℃條件下的穩定性明顯優于rB GGT;但噹溫度超過45℃時,rB GGT的穩定性更佳.通過對rE GGT和rB GGT的氨基痠組成及其大、小亞基界麵相互作用力的分析錶明,rE GGT大小亞基間疏水鍵的數目明顯多于rB GGT,有助于穩定其四級結構,使其在中低溫下具有良好的穩定性;而rB GGT氨基痠組成中荷電殘基和芳香族殘基的比例較高,可有效維持其二級結構的穩定性.
γ-곡안선전태매(GGT)시생물체내곡안선순배적관건매,재생물유궤합성영역구유중요적응용개치.금건립료대장간균화고초아포간균GGT적극륭、중조급유도표체방법.재차기출상,분별고찰료중조대장간균GGT(rE_GGT)화중조고초아포간균GGT(rB_GGT)적최화특성화은정성.결과표명,rE GGT대공체대초기분알(GpNA)적친화력(Km)우우rB GGT,단rB GGT적최화상수(Kcat)고체3.48×105 s-1,시rE_GGT적20배.은정성연구표명,rE GGT재pH 6～9화T＜45℃조건하적은정성명현우우rB GGT;단당온도초과45℃시,rB GGT적은정성경가.통과대rE GGT화rB GGT적안기산조성급기대、소아기계면상호작용력적분석표명,rE GGT대소아기간소수건적수목명현다우rB GGT,유조우은정기사급결구,사기재중저온하구유량호적은정성;이rB GGT안기산조성중하전잔기화방향족잔기적비례교고,가유효유지기이급결구적은정성.
