遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2014年
4期
346-353
,共8页
张蕾%隋御%王婷%李利坚%李元杰%金彩霞%徐方
張蕾%隋禦%王婷%李利堅%李元傑%金綵霞%徐方
장뢰%수어%왕정%리리견%리원걸%금채하%서방
RNA干扰%铂类耐药%hMMS2%人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞(THC8307/L-OHP)%细胞凋亡
RNA榦擾%鉑類耐藥%hMMS2%人高分化耐奧沙利鉑結腸癌細胞(THC8307/L-OHP)%細胞凋亡
RNA간우%박류내약%hMMS2%인고분화내오사리박결장암세포(THC8307/L-OHP)%세포조망
RNA interference%platinum resistance%hMMS2%human well-differentiated colorectal carcinoma L-OHP-resistant cell line%apoptosis
为探讨hMMS2(Human methyl methanesulfonate sensitive mutant 2)基因对人结肠癌细胞耐药逆转的影响,文章以人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞(THC8307/L-OHP)为实验材料,采用脂质体-质粒转染技术构建了带有干扰目的基因hMMS2的miRNA片段并携带绿色荧光蛋白标记重组质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2)的细胞系,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫荧光技术(Immunostaining technique)检测该细胞系的干扰效率.选择hMMS2低表达具有统计学意义的上述细胞系作为实验组细胞,同时将未曾作过处理的THC8307/L-OHP细胞作为空白对照组,转染绿色荧光蛋白空质粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR)的THC8307/L-OHP细胞作为阴性对照组,以噻唑蓝比色分析实验(MTT colorimetric analysis assay)、克隆形成实验(Colony formation assay)对3组细胞的存活率和克隆形成率进行检测,结果显示:实验组细胞的奥沙利铂半数抑制浓度(Half inhibition concentration,IC50)、耐药指数(Resistance index,RI)及克隆形成率(Colony-forming efficiency,CFE)均比对照组细胞明显降低(P＜0.05),而相对逆转率(Relative reverse efficiency,RRE)增高(P＜0.05),提示实验组细胞增殖能力减弱;以罗丹明123实验(Rhodamine 123 assay)结合倒置荧光显微镜、流式细胞仪检测技术等观测细胞的凋亡变化,结果显示,实验组细胞的凋亡率较对照组细胞显著增高(P＜0.05);两对照(空白、阴性)组间并无细胞增殖或凋亡的显著性差异.研究结果提示:下调hMMS2基因表达可逆转人高分化耐奥沙利铂结肠癌细胞对L-OHP的耐药性并促进结肠癌细胞的凋亡.
為探討hMMS2(Human methyl methanesulfonate sensitive mutant 2)基因對人結腸癌細胞耐藥逆轉的影響,文章以人高分化耐奧沙利鉑結腸癌細胞(THC8307/L-OHP)為實驗材料,採用脂質體-質粒轉染技術構建瞭帶有榦擾目的基因hMMS2的miRNA片段併攜帶綠色熒光蛋白標記重組質粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2)的細胞繫,通過實時熒光定量PCR(qRT-PCR)和免疫熒光技術(Immunostaining technique)檢測該細胞繫的榦擾效率.選擇hMMS2低錶達具有統計學意義的上述細胞繫作為實驗組細胞,同時將未曾作過處理的THC8307/L-OHP細胞作為空白對照組,轉染綠色熒光蛋白空質粒(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR)的THC8307/L-OHP細胞作為陰性對照組,以噻唑藍比色分析實驗(MTT colorimetric analysis assay)、剋隆形成實驗(Colony formation assay)對3組細胞的存活率和剋隆形成率進行檢測,結果顯示:實驗組細胞的奧沙利鉑半數抑製濃度(Half inhibition concentration,IC50)、耐藥指數(Resistance index,RI)及剋隆形成率(Colony-forming efficiency,CFE)均比對照組細胞明顯降低(P＜0.05),而相對逆轉率(Relative reverse efficiency,RRE)增高(P＜0.05),提示實驗組細胞增殖能力減弱;以囉丹明123實驗(Rhodamine 123 assay)結閤倒置熒光顯微鏡、流式細胞儀檢測技術等觀測細胞的凋亡變化,結果顯示,實驗組細胞的凋亡率較對照組細胞顯著增高(P＜0.05);兩對照(空白、陰性)組間併無細胞增殖或凋亡的顯著性差異.研究結果提示:下調hMMS2基因錶達可逆轉人高分化耐奧沙利鉑結腸癌細胞對L-OHP的耐藥性併促進結腸癌細胞的凋亡.
위탐토hMMS2(Human methyl methanesulfonate sensitive mutant 2)기인대인결장암세포내약역전적영향,문장이인고분화내오사리박결장암세포(THC8307/L-OHP)위실험재료,채용지질체-질립전염기술구건료대유간우목적기인hMMS2적miRNA편단병휴대록색형광단백표기중조질립(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-MMS2)적세포계,통과실시형광정량PCR(qRT-PCR)화면역형광기술(Immunostaining technique)검측해세포계적간우효솔.선택hMMS2저표체구유통계학의의적상술세포계작위실험조세포,동시장미증작과처리적THC8307/L-OHP세포작위공백대조조,전염록색형광단백공질립(pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR)적THC8307/L-OHP세포작위음성대조조,이새서람비색분석실험(MTT colorimetric analysis assay)、극륭형성실험(Colony formation assay)대3조세포적존활솔화극륭형성솔진행검측,결과현시:실험조세포적오사리박반수억제농도(Half inhibition concentration,IC50)、내약지수(Resistance index,RI)급극륭형성솔(Colony-forming efficiency,CFE)균비대조조세포명현강저(P＜0.05),이상대역전솔(Relative reverse efficiency,RRE)증고(P＜0.05),제시실험조세포증식능력감약;이라단명123실험(Rhodamine 123 assay)결합도치형광현미경、류식세포의검측기술등관측세포적조망변화,결과현시,실험조세포적조망솔교대조조세포현저증고(P＜0.05);량대조(공백、음성)조간병무세포증식혹조망적현저성차이.연구결과제시:하조hMMS2기인표체가역전인고분화내오사리박결장암세포대L-OHP적내약성병촉진결장암세포적조망.
