CAJ | 학술논문

[目的]探讨布鲁氏菌新型疫苗的构建表达和免疫原性检测.[方法]该研究所选的L7/L12核蛋白为公认的T细胞保护性抗原.它具有高度的保守性.通过试验,验证17.3 kDa蛋白是否具有保护作用.同时,对翻译起始因子3蛋白进行抗原预测.[结果]从布鲁氏菌中提取其全基因组DNA,测序正确后分别克隆至原核表达载体PET32a(+)上,经诱导表达出相应的重组蛋白,WB鉴定后纯化待用;同时,编码基因克隆至真核表达载体PCDNA3.1(+)上,将重组质粒转染COS-7细胞后经WB证实重组质粒构建成功.将重组蛋白混合弗氏佐剂免疫动物,同时DNA疫苗以PUMVC1-mGM-CSF重组质粒为佐剂(各100μg/只)肌肉免疫动物;每15 d免疫1次,加强免疫3次后检测免疫应答指标,并且进行组间比较.采取ELISA法检测到较高滴度的特异性抗体,WB也证实特异性抗体的产生.[结论]该研究成功构建了布鲁氏菌基因工程疫苗,在国内尚属首次.利用流式细胞仪的分型技术和ELI SPOT法评价布鲁氏菌疫苗的细胞免疫指标,将促进我国兽用疫苗及相关产品的实验室质控标准方法的建立和发展,为其临床应用奠定基础.
[목적]탐토포로씨균신형역묘적구건표체화면역원성검측.[방법]해연구소선적L7/L12핵단백위공인적T세포보호성항원.타구유고도적보수성.통과시험,험증17.3 kDa단백시부구유보호작용.동시,대번역기시인자3단백진행항원예측.[결과]종포로씨균중제취기전기인조DNA,측서정학후분별극륭지원핵표체재체PET32a(+)상,경유도표체출상응적중조단백,WB감정후순화대용;동시,편마기인극륭지진핵표체재체PCDNA3.1(+)상,장중조질립전염COS-7세포후경WB증실중조질립구건성공.장중조단백혼합불씨좌제면역동물,동시DNA역묘이PUMVC1-mGM-CSF중조질립위좌제(각100μg/지)기육면역동물;매15 d면역1차,가강면역3차후검측면역응답지표,병차진행조간비교.채취ELISA법검측도교고적도적특이성항체,WB야증실특이성항체적산생.[결론]해연구성공구건료포로씨균기인공정역묘,재국내상속수차.이용류식세포의적분형기술화ELI SPOT법평개포로씨균역묘적세포면역지표,장촉진아국수용역묘급상관산품적실험실질공표준방법적건립화발전,위기림상응용전정기출.