CAJ | 학술논문

采用最小表达框技术转化植物可以规避由骨架序列引起的安全风险.核基质结合区序列SAR (scaffold attachment region)可作为边界元件与核基质结合阻挡转基因片段邻近染色质区的作用与影响,提高外源基因稳定性.本研究在最小表达框序列两端添加SAR序列,提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性,提高转化基因的表达效率.首先,以GUS为目的基因构建带有SAR序列的最小表达框,以科农199为受体进行基因枪转化,同时以不加SAR序列的最小表达框片段为对照.带有SAR序列的最小表达框片段共轰击857个幼胚,T0代获得40株再生植株,PCR检测到16株阳性植株,转化效率为1.87％;对这16个阳性单株进行GUS染色,15株显色;从来自4个T0阳性植株的18个T1代植株中随机选取18株进行PCR和GUS染色检测,有15株表现为阳性.不带SAR序列的对照片段轰击1012个幼胚,获得31株再生植株,其中5株PCR阳性,转化效率0.49％,这5个阳性植株中仅2株为GUS染色阳性;来自于5个T0代PCR阳性株系的10个T1代单株中没有发现PCR和GUS染色阳性株.表明SAR序列可以提高基因枪转基因效率和目的基因表达稳定性.为了创制抗旱转基因小麦,以来自大豆的抗旱相关转录因子基因GmDREB3为目的基因,Bar基因为筛选标记基因,转化受体小麦济麦22,共轰击6045个幼胚,获得再生植株130株,PCR检测阳性植株30株,转化效率为0.50％;随机选取6株PCR阳性植株进行RT-PCR分析,其中5株可检测到外源基因的转录.进一步对这5株RT-PCR阳性植株插入片段完整性进行分析,其中4株插入片段基本完整.通过real-time PCR分析,发现T0代6个RT-PCR阳性植株的外源GmDREB3的拷贝数为1～3个.以上结果证明,在最小表达框两端加上SAR序列后可以提高小麦最小表达框转基因表达的稳定性.
채용최소표체광기술전화식물가이규피유골가서렬인기적안전풍험.핵기질결합구서렬SAR (scaffold attachment region)가작위변계원건여핵기질결합조당전기인편단린근염색질구적작용여영향,제고외원기인은정성.본연구재최소표체광서렬량단첨가SAR서렬,제고소맥최소표체광전기인표체적은정성,제고전화기인적표체효솔.수선,이GUS위목적기인구건대유SAR서렬적최소표체광,이과농199위수체진행기인창전화,동시이불가SAR서렬적최소표체광편단위대조.대유SAR서렬적최소표체광편단공굉격857개유배,T0대획득40주재생식주,PCR검측도16주양성식주,전화효솔위1.87％;대저16개양성단주진행GUS염색,15주현색;종래자4개T0양성식주적18개T1대식주중수궤선취18주진행PCR화GUS염색검측,유15주표현위양성.불대SAR서렬적대조편단굉격1012개유배,획득31주재생식주,기중5주PCR양성,전화효솔0.49％,저5개양성식주중부2주위GUS염색양성;래자우5개T0대PCR양성주계적10개T1대단주중몰유발현PCR화GUS염색양성주.표명SAR서렬가이제고기인창전기인효솔화목적기인표체은정성.위료창제항한전기인소맥,이래자대두적항한상관전록인자기인GmDREB3위목적기인,Bar기인위사선표기기인,전화수체소맥제맥22,공굉격6045개유배,획득재생식주130주,PCR검측양성식주30주,전화효솔위0.50％;수궤선취6주PCR양성식주진행RT-PCR분석,기중5주가검측도외원기인적전록.진일보대저5주RT-PCR양성식주삽입편단완정성진행분석,기중4주삽입편단기본완정.통과real-time PCR분석,발현T0대6개RT-PCR양성식주적외원GmDREB3적고패수위1～3개.이상결과증명,재최소표체광량단가상SAR서렬후가이제고소맥최소표체광전기인표체적은정성.