作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2014年
2期
355-361
,共7页
廖芳蕾%王鲁%辛可行%陈文荣%郭卫东
廖芳蕾%王魯%辛可行%陳文榮%郭衛東
료방뢰%왕로%신가행%진문영%곽위동
反义寡聚核苷酸抑制%NtGNL1%离体培养%花粉管%囊泡运输%膜流
反義寡聚覈苷痠抑製%NtGNL1%離體培養%花粉管%囊泡運輸%膜流
반의과취핵감산억제%NtGNL1%리체배양%화분관%낭포운수%막류
Antisense oligonucleotide inhibition%NtGNL1%in vitro culture systems%Pollen tube%Endosome trafficking%Membrane trafficking
为探讨反义寡聚核苷酸抑制(antisense oligodeoxynucleotides inhibition)技术在植物材料上的应用,以已知功能的NtGNLl (Nicotiana tabacum GNOM-Like1)为目标基因,寻找反义寡聚核苷酸抑制最适作用体系,并进一步分析NtGNL1的具体作用.根据目标基因mRNA序列设计反义寡聚核苷酸序列,商业合成后并将其添加到烟草胚珠、种子和花粉管离体培养的培养基中,以抑制NtGNL1的表达.结果表明,将反义寡聚核苷酸引入离体培养系统,短时间内抑制了目标基因mRNA的表达,但对胚胎发育过程的影响和种子萌发的抑制都不明显.在花粉离体萌发系统中,反义寡聚核苷酸抑制能够高效地引起目标基因mRNA的下调.对FM4-64染色的花粉管显微缩时观察发现,NtGNL1的下调能够引起囊泡分布和运输方向的改变.对花粉管膜流相关的5个基因的半定量分析也显示反义寡聚核苷酸进入花粉管后,导致3个基因的表达下调,暗示NtGNLJ抑制表达会影响花粉管囊泡运输的多个节点.
為探討反義寡聚覈苷痠抑製(antisense oligodeoxynucleotides inhibition)技術在植物材料上的應用,以已知功能的NtGNLl (Nicotiana tabacum GNOM-Like1)為目標基因,尋找反義寡聚覈苷痠抑製最適作用體繫,併進一步分析NtGNL1的具體作用.根據目標基因mRNA序列設計反義寡聚覈苷痠序列,商業閤成後併將其添加到煙草胚珠、種子和花粉管離體培養的培養基中,以抑製NtGNL1的錶達.結果錶明,將反義寡聚覈苷痠引入離體培養繫統,短時間內抑製瞭目標基因mRNA的錶達,但對胚胎髮育過程的影響和種子萌髮的抑製都不明顯.在花粉離體萌髮繫統中,反義寡聚覈苷痠抑製能夠高效地引起目標基因mRNA的下調.對FM4-64染色的花粉管顯微縮時觀察髮現,NtGNL1的下調能夠引起囊泡分佈和運輸方嚮的改變.對花粉管膜流相關的5箇基因的半定量分析也顯示反義寡聚覈苷痠進入花粉管後,導緻3箇基因的錶達下調,暗示NtGNLJ抑製錶達會影響花粉管囊泡運輸的多箇節點.
위탐토반의과취핵감산억제(antisense oligodeoxynucleotides inhibition)기술재식물재료상적응용,이이지공능적NtGNLl (Nicotiana tabacum GNOM-Like1)위목표기인,심조반의과취핵감산억제최괄작용체계,병진일보분석NtGNL1적구체작용.근거목표기인mRNA서렬설계반의과취핵감산서렬,상업합성후병장기첨가도연초배주、충자화화분관리체배양적배양기중,이억제NtGNL1적표체.결과표명,장반의과취핵감산인입리체배양계통,단시간내억제료목표기인mRNA적표체,단대배태발육과정적영향화충자맹발적억제도불명현.재화분리체맹발계통중,반의과취핵감산억제능구고효지인기목표기인mRNA적하조.대FM4-64염색적화분관현미축시관찰발현,NtGNL1적하조능구인기낭포분포화운수방향적개변.대화분관막류상관적5개기인적반정량분석야현시반의과취핵감산진입화분관후,도치3개기인적표체하조,암시NtGNLJ억제표체회영향화분관낭포운수적다개절점.
