作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2014年
2期
231-239
,共9页
李妮娜%丁林云%张志远%郭旺珍
李妮娜%丁林雲%張誌遠%郭旺珍
리니나%정림운%장지원%곽왕진
棉花%原生质体%PEG介导%转化%目标基因%瞬时表达
棉花%原生質體%PEG介導%轉化%目標基因%瞬時錶達
면화%원생질체%PEG개도%전화%목표기인%순시표체
Cotton%Protoplast%PEG-mediated%Transformation%Target genes%Transient expression
以棉花幼嫩子叶为材料,分析影响棉花叶肉原生质体分离及目标基因转化的主要因素,以棉花叶肉原生质体为受体,建立了稳定、高效的目标基因瞬时表达与鉴定体系.技术体系包括,选择自然生长12 d的棉花幼嫩子叶为材料,混合1.5％纤维素酶、0.4％离析酶、0.5 mol L-1甘露醇、20 mmol L-1 KCl、20 mmol L-1 MES、0.1 mol L-1 CaCl2和1.0 g L-1 BSA,在28℃黑暗条件下振荡酶解8h,可游离出浓度达1.0× 106 mL-1以上的纯净棉花叶肉原生质体.利用该方法将棉花锌指蛋白基因GhZFP2整合到pJIT 166-GFP质粒载体,构建了GhZFP2∶GFP融合载体,采用40％PEG-4000介导转化,获得高转化率的棉花叶肉原生质体.对目标基因瞬时表达产物检测表明,GhZFP2蛋白清晰定位在细胞核上.
以棉花幼嫩子葉為材料,分析影響棉花葉肉原生質體分離及目標基因轉化的主要因素,以棉花葉肉原生質體為受體,建立瞭穩定、高效的目標基因瞬時錶達與鑒定體繫.技術體繫包括,選擇自然生長12 d的棉花幼嫩子葉為材料,混閤1.5％纖維素酶、0.4％離析酶、0.5 mol L-1甘露醇、20 mmol L-1 KCl、20 mmol L-1 MES、0.1 mol L-1 CaCl2和1.0 g L-1 BSA,在28℃黑暗條件下振盪酶解8h,可遊離齣濃度達1.0× 106 mL-1以上的純淨棉花葉肉原生質體.利用該方法將棉花鋅指蛋白基因GhZFP2整閤到pJIT 166-GFP質粒載體,構建瞭GhZFP2∶GFP融閤載體,採用40％PEG-4000介導轉化,穫得高轉化率的棉花葉肉原生質體.對目標基因瞬時錶達產物檢測錶明,GhZFP2蛋白清晰定位在細胞覈上.
이면화유눈자협위재료,분석영향면화협육원생질체분리급목표기인전화적주요인소,이면화협육원생질체위수체,건립료은정、고효적목표기인순시표체여감정체계.기술체계포괄,선택자연생장12 d적면화유눈자협위재료,혼합1.5％섬유소매、0.4％리석매、0.5 mol L-1감로순、20 mmol L-1 KCl、20 mmol L-1 MES、0.1 mol L-1 CaCl2화1.0 g L-1 BSA,재28℃흑암조건하진탕매해8h,가유리출농도체1.0× 106 mL-1이상적순정면화협육원생질체.이용해방법장면화자지단백기인GhZFP2정합도pJIT 166-GFP질립재체,구건료GhZFP2∶GFP융합재체,채용40％PEG-4000개도전화,획득고전화솔적면화협육원생질체.대목표기인순시표체산물검측표명,GhZFP2단백청석정위재세포핵상.
