河南农业科学
河南農業科學
하남농업과학
JOURNAL OF HENAN AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
2期
72-79
,共8页
刘娜%徐汉卿%崔健%茆灿泉%许雷
劉娜%徐漢卿%崔健%茆燦泉%許雷
류나%서한경%최건%묘찬천%허뢰
拟除虫菊酯类农药%生物降解%酯酶%estA基因%可溶性蛋白%原核表达条件优化
擬除蟲菊酯類農藥%生物降解%酯酶%estA基因%可溶性蛋白%原覈錶達條件優化
의제충국지류농약%생물강해%지매%estA기인%가용성단백%원핵표체조건우화
pyrethroid pesticides%biodegradation%esterase%estA gene%soluble protein%optimization of prokaryotic expression conditions
以前期克隆得到的拟除虫菊酯类农药降解基因estA(GenBank:DQ906143)为出发基因,构建表达系统,获得可溶性融合蛋白,并通过优化诱导表达条件,获得具有实际应用价值的相关应用参数.结果表明,成功构建了重组表达载体pMal-c2X-estA并转化至宿主菌BL21 (DE3),获得酯酶estA基因诱导表达系统；通过SDS-PAGE凝胶电泳、以α-乙酸萘酯为底物的酶活性检测及Western blot方法,确认外源蛋白EstA在大肠杆菌宿主菌中成功表达并具有酯酶活性.重组基因工程菌可溶性原核表达诱导条件的优化试验表明,其最佳诱导表达条件是:Ca2+浓度1.0 mmol/L、诱导初始OD600值0.7、诱导剂IPTG浓度0.1 mmol/L、诱导初始pH值7、诱导温度26℃、诱导时间17.5h,优化后的酯酶活性(92.03U/mg)较优化前(44.64 U/mg)提高了1倍多.
以前期剋隆得到的擬除蟲菊酯類農藥降解基因estA(GenBank:DQ906143)為齣髮基因,構建錶達繫統,穫得可溶性融閤蛋白,併通過優化誘導錶達條件,穫得具有實際應用價值的相關應用參數.結果錶明,成功構建瞭重組錶達載體pMal-c2X-estA併轉化至宿主菌BL21 (DE3),穫得酯酶estA基因誘導錶達繫統；通過SDS-PAGE凝膠電泳、以α-乙痠萘酯為底物的酶活性檢測及Western blot方法,確認外源蛋白EstA在大腸桿菌宿主菌中成功錶達併具有酯酶活性.重組基因工程菌可溶性原覈錶達誘導條件的優化試驗錶明,其最佳誘導錶達條件是:Ca2+濃度1.0 mmol/L、誘導初始OD600值0.7、誘導劑IPTG濃度0.1 mmol/L、誘導初始pH值7、誘導溫度26℃、誘導時間17.5h,優化後的酯酶活性(92.03U/mg)較優化前(44.64 U/mg)提高瞭1倍多.
이전기극륭득도적의제충국지류농약강해기인estA(GenBank:DQ906143)위출발기인,구건표체계통,획득가용성융합단백,병통과우화유도표체조건,획득구유실제응용개치적상관응용삼수.결과표명,성공구건료중조표체재체pMal-c2X-estA병전화지숙주균BL21 (DE3),획득지매estA기인유도표체계통；통과SDS-PAGE응효전영、이α-을산내지위저물적매활성검측급Western blot방법,학인외원단백EstA재대장간균숙주균중성공표체병구유지매활성.중조기인공정균가용성원핵표체유도조건적우화시험표명,기최가유도표체조건시:Ca2+농도1.0 mmol/L、유도초시OD600치0.7、유도제IPTG농도0.1 mmol/L、유도초시pH치7、유도온도26℃、유도시간17.5h,우화후적지매활성(92.03U/mg)교우화전(44.64 U/mg)제고료1배다.
