中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2013年
10期
1363-1368
,共6页
姜琳琳%张孝云%马莉%颜次慧%齐怀丰%熊冬生%范冬梅
薑琳琳%張孝雲%馬莉%顏次慧%齊懷豐%熊鼕生%範鼕梅
강림림%장효운%마리%안차혜%제부봉%웅동생%범동매
CD19%力达霉素%B性恶性淋巴瘤%基因工程抗体%DNA损伤%强化融合蛋白
CD19%力達黴素%B性噁性淋巴瘤%基因工程抗體%DNA損傷%彊化融閤蛋白
CD19%력체매소%B성악성림파류%기인공정항체%DNA손상%강화융합단백
目的 构建及表达抗CD19(Fab)-LDP(LDP为LDM辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,进行体外生物活性的研究.方法 采用基因克隆技术,构建基因重组质粒pAZYanti-CD19(Fab)-LDP,测序进行鉴定,转化至大肠杆菌进行表达,表达产物经Protein G亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定;采用流式细胞检测技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白与B淋巴瘤Raji细胞的结合活性;采用间接免疫荧光法,检测CD19介导细胞内化的情况;采用MTT法检测强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对CD19+Raji细胞的靶向杀伤活性;采用彗星电泳的方法,检测强化融合蛋白对Raji细胞DNA的损伤程度.结果 用基因工程方法成功的构建、表达融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDP,Protein G亲和层析柱纯化后在SDS-PAGE上表现为相对分子质量约60 ku蛋白条带,且融合蛋白可与Raji细胞特异结合,并能介导细胞的内化;强化融合蛋白对Raji细胞具有较强的细胞毒性,并能引起细胞DNA损伤.结论 强化融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM可以靶向作用于B淋巴瘤细胞,并具有较强的抗肿瘤活性,在恶性B淋巴瘤生物治疗中具有潜在的应用价值.
目的 構建及錶達抗CD19(Fab)-LDP(LDP為LDM輔基蛋白)融閤蛋白,製備彊化融閤蛋白anti-CD19(Fab)-LDM,進行體外生物活性的研究.方法 採用基因剋隆技術,構建基因重組質粒pAZYanti-CD19(Fab)-LDP,測序進行鑒定,轉化至大腸桿菌進行錶達,錶達產物經Protein G親和層析柱純化後,進行SDS-PAGE分析和Western blot鑒定;採用流式細胞檢測技術(FACS)和激光共聚焦顯微鏡技術,檢測融閤蛋白與B淋巴瘤Raji細胞的結閤活性;採用間接免疫熒光法,檢測CD19介導細胞內化的情況;採用MTT法檢測彊化融閤蛋白anti-CD19(Fab)-LDM對CD19+Raji細胞的靶嚮殺傷活性;採用彗星電泳的方法,檢測彊化融閤蛋白對Raji細胞DNA的損傷程度.結果 用基因工程方法成功的構建、錶達融閤蛋白anti-CD19(Fab)-LDP,Protein G親和層析柱純化後在SDS-PAGE上錶現為相對分子質量約60 ku蛋白條帶,且融閤蛋白可與Raji細胞特異結閤,併能介導細胞的內化;彊化融閤蛋白對Raji細胞具有較彊的細胞毒性,併能引起細胞DNA損傷.結論 彊化融閤蛋白anti-CD19(Fab)-LDM可以靶嚮作用于B淋巴瘤細胞,併具有較彊的抗腫瘤活性,在噁性B淋巴瘤生物治療中具有潛在的應用價值.
목적 구건급표체항CD19(Fab)-LDP(LDP위LDM보기단백)융합단백,제비강화융합단백anti-CD19(Fab)-LDM,진행체외생물활성적연구.방법 채용기인극륭기술,구건기인중조질립pAZYanti-CD19(Fab)-LDP,측서진행감정,전화지대장간균진행표체,표체산물경Protein G친화층석주순화후,진행SDS-PAGE분석화Western blot감정;채용류식세포검측기술(FACS)화격광공취초현미경기술,검측융합단백여B림파류Raji세포적결합활성;채용간접면역형광법,검측CD19개도세포내화적정황;채용MTT법검측강화융합단백anti-CD19(Fab)-LDM대CD19+Raji세포적파향살상활성;채용혜성전영적방법,검측강화융합단백대Raji세포DNA적손상정도.결과 용기인공정방법성공적구건、표체융합단백anti-CD19(Fab)-LDP,Protein G친화층석주순화후재SDS-PAGE상표현위상대분자질량약60 ku단백조대,차융합단백가여Raji세포특이결합,병능개도세포적내화;강화융합단백대Raji세포구유교강적세포독성,병능인기세포DNA손상.결론 강화융합단백anti-CD19(Fab)-LDM가이파향작용우B림파류세포,병구유교강적항종류활성,재악성B림파류생물치료중구유잠재적응용개치.
