军事医学
軍事醫學
군사의학
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2013年
9期
681-684,691
,共5页
彭剑淳%高博%王怡%付秋霞%樊炜%周欠欠%贾帅争%詹林盛
彭劍淳%高博%王怡%付鞦霞%樊煒%週欠欠%賈帥爭%詹林盛
팽검순%고박%왕이%부추하%번위%주흠흠%가수쟁%첨림성
丙型肝炎病毒%荧光素酶类%萤火虫%Gaussia荧光素酶%细胞模型%复制子
丙型肝炎病毒%熒光素酶類%螢火蟲%Gaussia熒光素酶%細胞模型%複製子
병형간염병독%형광소매류%형화충%Gaussia형광소매%세포모형%복제자
目的 构建双荧光素酶标记丙型肝炎病毒(HCV)亚基因组复制子细胞模型,为HCV研究提供有效工具.方法 通过单克隆筛选及慢病毒感染构建双荧光素酶标记的HCV亚基因组复制子细胞模型(HCV Fluc-Ubi-Gluc).利用荧光素酶检测、Western印迹检测鉴定细胞模型,利用IFN-α对HCV抗病毒效果评价验证细胞模型的有效性.结果 筛选所得HCV亚基因组细胞克隆检测到荧光素酶活性,Western 印迹检测到HCV NS5A蛋白表达.NS3/4A对黄色荧光蛋白(YFP)标记的MAVS(YFP-MAVS)切割作用使亚细胞定位发生转移.IFN-α处理后荧光素酶活性、HCV蛋白表达水平明显降低.结论 该模型采用萤火虫荧光素酶报告基因指示HCV亚基因组在细胞内的复制水平,Gaussia荧光素酶指示细胞的生长数量,能准确反映候选药物对HCV复制水平的影响,并有效排除药物的细胞毒性干扰,具有操作简单、快速等优点,在抗病毒药物高通量筛选、HCV致病机制等研究方面具有一定的价值.
目的 構建雙熒光素酶標記丙型肝炎病毒(HCV)亞基因組複製子細胞模型,為HCV研究提供有效工具.方法 通過單剋隆篩選及慢病毒感染構建雙熒光素酶標記的HCV亞基因組複製子細胞模型(HCV Fluc-Ubi-Gluc).利用熒光素酶檢測、Western印跡檢測鑒定細胞模型,利用IFN-α對HCV抗病毒效果評價驗證細胞模型的有效性.結果 篩選所得HCV亞基因組細胞剋隆檢測到熒光素酶活性,Western 印跡檢測到HCV NS5A蛋白錶達.NS3/4A對黃色熒光蛋白(YFP)標記的MAVS(YFP-MAVS)切割作用使亞細胞定位髮生轉移.IFN-α處理後熒光素酶活性、HCV蛋白錶達水平明顯降低.結論 該模型採用螢火蟲熒光素酶報告基因指示HCV亞基因組在細胞內的複製水平,Gaussia熒光素酶指示細胞的生長數量,能準確反映候選藥物對HCV複製水平的影響,併有效排除藥物的細胞毒性榦擾,具有操作簡單、快速等優點,在抗病毒藥物高通量篩選、HCV緻病機製等研究方麵具有一定的價值.
목적 구건쌍형광소매표기병형간염병독(HCV)아기인조복제자세포모형,위HCV연구제공유효공구.방법 통과단극륭사선급만병독감염구건쌍형광소매표기적HCV아기인조복제자세포모형(HCV Fluc-Ubi-Gluc).이용형광소매검측、Western인적검측감정세포모형,이용IFN-α대HCV항병독효과평개험증세포모형적유효성.결과 사선소득HCV아기인조세포극륭검측도형광소매활성,Western 인적검측도HCV NS5A단백표체.NS3/4A대황색형광단백(YFP)표기적MAVS(YFP-MAVS)절할작용사아세포정위발생전이.IFN-α처리후형광소매활성、HCV단백표체수평명현강저.결론 해모형채용형화충형광소매보고기인지시HCV아기인조재세포내적복제수평,Gaussia형광소매지시세포적생장수량,능준학반영후선약물대HCV복제수평적영향,병유효배제약물적세포독성간우,구유조작간단、쾌속등우점,재항병독약물고통량사선、HCV치병궤제등연구방면구유일정적개치.
