集美大学学报（自然科学版）
集美大學學報（自然科學版）
집미대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF JIMEI UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2014年
3期
185-191
,共7页
陈丽娜%朱艳冰%倪辉%李利君
陳麗娜%硃豔冰%倪輝%李利君
진려나%주염빙%예휘%리리군
法夫酵母%整合载体%构建%G418抗性
法伕酵母%整閤載體%構建%G418抗性
법부효모%정합재체%구건%G418항성
为了建立法夫酵母虾青素代谢途径研究和分子育种的技术体系,构建了法夫酵母的整合型表达载体.通过测定法夫酵母对G418的抗性来确定抗性筛选物的质量浓度,以来源于法夫酵母本身的rRNA基因为基因同源重组片段,利用法夫酵母肌动蛋白启动子和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gpd)启动子,构建了携带G418抗性基因的整合型载体pMD-18spakta和pMD-18spgktg.结果表明:法夫酵母对20 μg/mL质量浓度的G418敏感,将构建的载体转化法夫酵母菌株后,筛选得到了能够在含有G418的培养基上生长的转化子;利用PCR的方法检测到转化子中存在的抗性基因.将筛选得到的阳性菌株连续传代培养10次后,发现该菌株的G418抗性仍然存在;以总DNA为模板,用PCR的方法仍可检测到G418抗性基因.说明已经构建得到了遗传稳定性良好的法夫酵母整合型表达载体,构建的质粒pMD-18spakta和pMD-18spgktg可作为法夫酵母整合载体应用于法夫酵母的DNA重组实验.
為瞭建立法伕酵母蝦青素代謝途徑研究和分子育種的技術體繫,構建瞭法伕酵母的整閤型錶達載體.通過測定法伕酵母對G418的抗性來確定抗性篩選物的質量濃度,以來源于法伕酵母本身的rRNA基因為基因同源重組片段,利用法伕酵母肌動蛋白啟動子和甘油醛-3-燐痠脫氫酶(gpd)啟動子,構建瞭攜帶G418抗性基因的整閤型載體pMD-18spakta和pMD-18spgktg.結果錶明:法伕酵母對20 μg/mL質量濃度的G418敏感,將構建的載體轉化法伕酵母菌株後,篩選得到瞭能夠在含有G418的培養基上生長的轉化子;利用PCR的方法檢測到轉化子中存在的抗性基因.將篩選得到的暘性菌株連續傳代培養10次後,髮現該菌株的G418抗性仍然存在;以總DNA為模闆,用PCR的方法仍可檢測到G418抗性基因.說明已經構建得到瞭遺傳穩定性良好的法伕酵母整閤型錶達載體,構建的質粒pMD-18spakta和pMD-18spgktg可作為法伕酵母整閤載體應用于法伕酵母的DNA重組實驗.
위료건입법부효모하청소대사도경연구화분자육충적기술체계,구건료법부효모적정합형표체재체.통과측정법부효모대G418적항성래학정항성사선물적질량농도,이래원우법부효모본신적rRNA기인위기인동원중조편단,이용법부효모기동단백계동자화감유철-3-린산탈경매(gpd)계동자,구건료휴대G418항성기인적정합형재체pMD-18spakta화pMD-18spgktg.결과표명:법부효모대20 μg/mL질량농도적G418민감,장구건적재체전화법부효모균주후,사선득도료능구재함유G418적배양기상생장적전화자;이용PCR적방법검측도전화자중존재적항성기인.장사선득도적양성균주련속전대배양10차후,발현해균주적G418항성잉연존재;이총DNA위모판,용PCR적방법잉가검측도G418항성기인.설명이경구건득도료유전은정성량호적법부효모정합형표체재체,구건적질립pMD-18spakta화pMD-18spgktg가작위법부효모정합재체응용우법부효모적DNA중조실험.
