CAJ | 학술논문

腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK),在真核细胞生物中广泛存在,是调控机体能量代谢的关键酶.本研究旨在构建并筛选猪(Sus scrofa)AMPKα基因的有效siRNA干扰载体,并探讨AMPKα基因对脂肪分解关键酶基因表达的影响.根据猪AMPKα基因(GenBank登录号:NM-001167633)全长cDNA序列,设计合成其特异性发夹siR-NA干扰片段,将其克隆插入pSilencer 4.1-CMV neo Vector干扰载体中,构建猪AMPKα基因的siRNA真核表达载体RA1和RA2,并通过PCR、双酶切和测序对其进行鉴定.构建成功后转染猪肌内脂肪前体细胞并检测其干扰效果及对脂肪分解关键酶一一激素敏感脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)、脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)和肉毒碱棕榈酰转移酶(carnitine palmitoyl transferase,CPTl)基因表达的影响.结果表明,所构建的猪AMPKα基因的特异性siRNA表达载体RA1和RA2均可降低猪AMPKα mRNA表达(P＜0.05),而且RA2干扰效果优于RA1.用RA2干扰AMPKα后,猪肌内脂肪前体细胞中AMPKα及脂肪分解关键酶HSL、ATGL和CPT1基因表达量显著下降(P＜0.05).提示,抑制AMPKα基因表达后,猪肌内脂肪前体细胞中脂肪分解和脂肪酸氧化速率降低.本研究结果为深入探讨AMPKα对猪脂肪代谢的影响机制及通过营养调控基因表达进而调控猪体脂沉积提供基础资料.
선감산활화단백격매(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK),재진핵세포생물중엄범존재,시조공궤체능량대사적관건매.본연구지재구건병사선저(Sus scrofa)AMPKα기인적유효siRNA간우재체,병탐토AMPKα기인대지방분해관건매기인표체적영향.근거저AMPKα기인(GenBank등록호:NM-001167633)전장cDNA서렬,설계합성기특이성발협siR-NA간우편단,장기극륭삽입pSilencer 4.1-CMV neo Vector간우재체중,구건저AMPKα기인적siRNA진핵표체재체RA1화RA2,병통과PCR、쌍매절화측서대기진행감정.구건성공후전염저기내지방전체세포병검측기간우효과급대지방분해관건매일일격소민감지방매(hormone sensitive lipase,HSL)、지방감유삼지지방매(adipose triglyceride lipase,ATGL)화육독감종려선전이매(carnitine palmitoyl transferase,CPTl)기인표체적영향.결과표명,소구건적저AMPKα기인적특이성siRNA표체재체RA1화RA2균가강저저AMPKα mRNA표체(P＜0.05),이차RA2간우효과우우RA1.용RA2간우AMPKα후,저기내지방전체세포중AMPKα급지방분해관건매HSL、ATGL화CPT1기인표체량현저하강(P＜0.05).제시,억제AMPKα기인표체후,저기내지방전체세포중지방분해화지방산양화속솔강저.본연구결과위심입탐토AMPKα대저지방대사적영향궤제급통과영양조공기인표체진이조공저체지침적제공기출자료.