农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2013年
9期
1009-1018
,共10页
叶绿体转运肽%高粱%5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶%转基因%玉米
葉綠體轉運肽%高粱%5-烯醇式丙酮酰莽草痠-3-燐痠閤酶%轉基因%玉米
협록체전운태%고량%5-희순식병동선망초산-3-린산합매%전기인%옥미
Chloroplast transit peptide(CTP)%Sorghum bicolor%5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase (EPSPS)%Transgene%Zea mays
5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)催化莽草酸-3-磷酸(S3P)与磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)合成5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸(EPSP),具有与草甘膦结合的活性位点,且结合后会抑制EPSPS的活性,在植物抗除草剂基因工程中具有重要的应用价值.为了培育抗草甘膦玉米(Zea mays),本研究通过对高粱(Sorghum bicolor)EPSPS基因的结构分析,克隆了该基因5'端的叶绿体转运肽(chloroplast transit peptide,CTP).将该转运肽与来源于农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株CP4 EPSPS基因整合,以Ubiquitin为启动子,35S polyA为终止子,构建表达载体,同时以不含有转运肽的CP4 EPSPS基因为对照,遗传转化玉米得到稳定转基因株系；用PCR、Southern blot、ELISA等方法检测转基因玉米CP4 EPSPS基因的表达量并对其进行草甘膦抗性检测,研究发现,不含转运肽的转化事件虽然CP4 EPSPS基因表达量与含有转运肽的基本一致但却不具有草甘膦抗性,而含有转运肽的转化事件则抗性明显.说明转运肽并不影响CP4 EPSPS基因的表达,但对转基因植株草甘膦抗性起着重要作用,说明本研究克隆的叶绿体转运肽能够正常行使其生物学功能.研究结果为利用EPSPS基因培育抗草甘膦作物提供了重要参考资料.
5-烯醇式丙酮酰莽草痠-3-燐痠閤酶(EPSPS)催化莽草痠-3-燐痠(S3P)與燐痠烯醇式丙酮痠(PEP)閤成5-烯醇式丙酮酰莽草痠-3-燐痠(EPSP),具有與草甘膦結閤的活性位點,且結閤後會抑製EPSPS的活性,在植物抗除草劑基因工程中具有重要的應用價值.為瞭培育抗草甘膦玉米(Zea mays),本研究通過對高粱(Sorghum bicolor)EPSPS基因的結構分析,剋隆瞭該基因5'耑的葉綠體轉運肽(chloroplast transit peptide,CTP).將該轉運肽與來源于農桿菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株CP4 EPSPS基因整閤,以Ubiquitin為啟動子,35S polyA為終止子,構建錶達載體,同時以不含有轉運肽的CP4 EPSPS基因為對照,遺傳轉化玉米得到穩定轉基因株繫；用PCR、Southern blot、ELISA等方法檢測轉基因玉米CP4 EPSPS基因的錶達量併對其進行草甘膦抗性檢測,研究髮現,不含轉運肽的轉化事件雖然CP4 EPSPS基因錶達量與含有轉運肽的基本一緻但卻不具有草甘膦抗性,而含有轉運肽的轉化事件則抗性明顯.說明轉運肽併不影響CP4 EPSPS基因的錶達,但對轉基因植株草甘膦抗性起著重要作用,說明本研究剋隆的葉綠體轉運肽能夠正常行使其生物學功能.研究結果為利用EPSPS基因培育抗草甘膦作物提供瞭重要參攷資料.
5-희순식병동선망초산-3-린산합매(EPSPS)최화망초산-3-린산(S3P)여린산희순식병동산(PEP)합성5-희순식병동선망초산-3-린산(EPSP),구유여초감련결합적활성위점,차결합후회억제EPSPS적활성,재식물항제초제기인공정중구유중요적응용개치.위료배육항초감련옥미(Zea mays),본연구통과대고량(Sorghum bicolor)EPSPS기인적결구분석,극륭료해기인5'단적협록체전운태(chloroplast transit peptide,CTP).장해전운태여래원우농간균(Agrobacterium tumefaciens)균주CP4 EPSPS기인정합,이Ubiquitin위계동자,35S polyA위종지자,구건표체재체,동시이불함유전운태적CP4 EPSPS기인위대조,유전전화옥미득도은정전기인주계；용PCR、Southern blot、ELISA등방법검측전기인옥미CP4 EPSPS기인적표체량병대기진행초감련항성검측,연구발현,불함전운태적전화사건수연CP4 EPSPS기인표체량여함유전운태적기본일치단각불구유초감련항성,이함유전운태적전화사건칙항성명현.설명전운태병불영향CP4 EPSPS기인적표체,단대전기인식주초감련항성기착중요작용,설명본연구극륭적협록체전운태능구정상행사기생물학공능.연구결과위이용EPSPS기인배육항초감련작물제공료중요삼고자료.
