西北林学院学报
西北林學院學報
서북림학원학보
JOURNAL OF NORTHWEST FORESTRY UNIVERSITY
2013年
5期
95-99
,共5页
油松%苯丙氨酸解氨酶%原核表达%分析
油鬆%苯丙氨痠解氨酶%原覈錶達%分析
유송%분병안산해안매%원핵표체%분석
Pinus tabulaeformis%phenylalanine ammonia-lyase%prokaryotic expression%analysis
利用基因重组技术,以油松PAL基因(TaPAL) CDS区(2 157 bp)作为外源基因的同源重组片段,构建了pET-28a-TaPAL重组表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中融合表达并进行分析.经SDS-PAGE电泳检测,在分子量80 KD处获得一条特异蛋白的表达条带,且其大小与预期相符.在温度28℃,IPTG浓度1.5 mmol· L-1,时间3h条件下,重组质粒的表达量最大.可溶性分析表明,在最佳诱导条件下,该蛋白主要以包涵体形式存在.粗酶活性测定表明,粗酶(在20℃、IPTG浓度1 mm01·L-1条件下诱导10 h)比活力为55.3μmol·min-1·gpro-1,即55.3U·g-1.构建的pET-28a-TaPAL重组载体能够在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出具有生物活性的融合蛋白.
利用基因重組技術,以油鬆PAL基因(TaPAL) CDS區(2 157 bp)作為外源基因的同源重組片段,構建瞭pET-28a-TaPAL重組錶達載體,在大腸桿菌BL21(DE3)中融閤錶達併進行分析.經SDS-PAGE電泳檢測,在分子量80 KD處穫得一條特異蛋白的錶達條帶,且其大小與預期相符.在溫度28℃,IPTG濃度1.5 mmol· L-1,時間3h條件下,重組質粒的錶達量最大.可溶性分析錶明,在最佳誘導條件下,該蛋白主要以包涵體形式存在.粗酶活性測定錶明,粗酶(在20℃、IPTG濃度1 mm01·L-1條件下誘導10 h)比活力為55.3μmol·min-1·gpro-1,即55.3U·g-1.構建的pET-28a-TaPAL重組載體能夠在大腸桿菌BL21(DE3)中錶達齣具有生物活性的融閤蛋白.
이용기인중조기술,이유송PAL기인(TaPAL) CDS구(2 157 bp)작위외원기인적동원중조편단,구건료pET-28a-TaPAL중조표체재체,재대장간균BL21(DE3)중융합표체병진행분석.경SDS-PAGE전영검측,재분자량80 KD처획득일조특이단백적표체조대,차기대소여예기상부.재온도28℃,IPTG농도1.5 mmol· L-1,시간3h조건하,중조질립적표체량최대.가용성분석표명,재최가유도조건하,해단백주요이포함체형식존재.조매활성측정표명,조매(재20℃、IPTG농도1 mm01·L-1조건하유도10 h)비활력위55.3μmol·min-1·gpro-1,즉55.3U·g-1.구건적pET-28a-TaPAL중조재체능구재대장간균BL21(DE3)중표체출구유생물활성적융합단백.
