中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2013年
9期
1725-1728
,共4页
陈舒%罗铭%蔡望青%李方成%何志威%刘安民
陳舒%囉銘%蔡望青%李方成%何誌威%劉安民
진서%라명%채망청%리방성%하지위%류안민
短发夹状RNA%髓鞘相关糖蛋白%慢病毒
短髮夾狀RNA%髓鞘相關糖蛋白%慢病毒
단발협상RNA%수초상관당단백%만병독
Short hairpin RNA%Myelin-associated glycoprotein%Lentivirus
目的:设计以MAG基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒载体并鉴定此RNA干扰体系对MAG基因表达的影响.方法:将3条靶向大鼠MAG基因的shRNA片段插入至慢病毒载体pWPI,与pCDNA3-MAG-FLAG质粒用Lipofectamine 2000共转染293T细胞,Western blotting法鉴定出最有效的shRNA.此重组质粒与pAX2和pMD2G经293T细胞包装后,产生的重组慢病毒感染少突胶质细胞,48 h后Western blotting法检测MAG蛋白的表达情况.结果:经双酶切后测序鉴定,构建了MAG shRNA慢病毒载体pWPI-MAG,鉴定出shRNA-2为最为有效的shRNA.重组慢病毒能明显抑制少突胶质细胞中MAG的表达.结论:慢病毒介导的shRNA 干扰技术可特异性阻断MAG的表达,为进一步探讨MAG特异性shRNA治疗神经系统髓鞘损伤奠定了基础.
目的:設計以MAG基因為靶點的短髮夾狀RNA(shRNA),構建重組慢病毒載體併鑒定此RNA榦擾體繫對MAG基因錶達的影響.方法:將3條靶嚮大鼠MAG基因的shRNA片段插入至慢病毒載體pWPI,與pCDNA3-MAG-FLAG質粒用Lipofectamine 2000共轉染293T細胞,Western blotting法鑒定齣最有效的shRNA.此重組質粒與pAX2和pMD2G經293T細胞包裝後,產生的重組慢病毒感染少突膠質細胞,48 h後Western blotting法檢測MAG蛋白的錶達情況.結果:經雙酶切後測序鑒定,構建瞭MAG shRNA慢病毒載體pWPI-MAG,鑒定齣shRNA-2為最為有效的shRNA.重組慢病毒能明顯抑製少突膠質細胞中MAG的錶達.結論:慢病毒介導的shRNA 榦擾技術可特異性阻斷MAG的錶達,為進一步探討MAG特異性shRNA治療神經繫統髓鞘損傷奠定瞭基礎.
목적:설계이MAG기인위파점적단발협상RNA(shRNA),구건중조만병독재체병감정차RNA간우체계대MAG기인표체적영향.방법:장3조파향대서MAG기인적shRNA편단삽입지만병독재체pWPI,여pCDNA3-MAG-FLAG질립용Lipofectamine 2000공전염293T세포,Western blotting법감정출최유효적shRNA.차중조질립여pAX2화pMD2G경293T세포포장후,산생적중조만병독감염소돌효질세포,48 h후Western blotting법검측MAG단백적표체정황.결과:경쌍매절후측서감정,구건료MAG shRNA만병독재체pWPI-MAG,감정출shRNA-2위최위유효적shRNA.중조만병독능명현억제소돌효질세포중MAG적표체.결론:만병독개도적shRNA 간우기술가특이성조단MAG적표체,위진일보탐토MAG특이성shRNA치료신경계통수초손상전정료기출.
