CAJ | 학술논문

目的:研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)刺激后所得的脐带间充质干细胞条件培养基对脐血CD34+细胞在半固体培养基中集落形成个数及种类的影响.方法:将3～6代人脐带来源间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)以2×106接种到75cm2培养瓶中,其中刺激组加入TNF-α(10 g/L),48 h后收集上清作为条件培养基.Real-time PCR检测hUC-MSCs中各类造血因子mRNA的表达量.密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,磁珠分选CD34+细胞,流式细胞术检测细胞纯度后分5组接种到6孔板内:TNF-α刺激hUC-MSC上清+不完全甲基纤维素培养基；hUC-MSC上清+不完全甲基纤维素培养基；TNF-α+DMEM/F12完全培养基+不完全甲基纤维素培养基；完全甲基纤维素培养基；DMEM/F12完全培养基+不完全甲基纤维素培养基.10 d后显微镜下计数各类集落形成单位(colony-forming unit,CFU)的数目,收集集落形成细胞,流式细胞术检测其表型特征.结果:(1)TNF-α刺激后hUC-MSCs中粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimu-lating factor,G-CSF)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)mRNA表达上调.(2)两种条件培养组均可见粒系CFU(granulocyte CFU,CFU-G)、巨噬系CFU(macrophage CFU,CFU-M)和粒巨噬系CFU(granulocyte-macrophage CFU,CFU-GM),但TNF-α刺激组CFU-G和CFU-M的数目约为未刺激组的1.5倍,CFU-GM约为未刺激组的2倍；阳性对照组中除粒系、巨噬系集落外还可见红系集落；而DMEM/F12完全培养基加或不加TNF-α组10 d后均未见集落形成.(3)流式细胞术检测TNF-α刺激组与未刺激组集落细胞表型CD14、CD45和CD11b,未见明显差异.结论:hUC-MSC上清作为条件培养基可在体外促进CD34+细胞分化增殖为髓系细胞,具有造血支持作用,TNF-α刺激后此作用增强.
목적:연구종류배사인자α(tumor necrosis factor α,TNF-α)자격후소득적제대간충질간세포조건배양기대제혈CD34+세포재반고체배양기중집락형성개수급충류적영향.방법:장3～6대인제대래원간충질간세포(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)이2×106접충도75cm2배양병중,기중자격조가입TNF-α(10 g/L),48 h후수집상청작위조건배양기.Real-time PCR검측hUC-MSCs중각류조혈인자mRNA적표체량.밀도제도리심법분리제혈단개핵세포,자주분선CD34+세포,류식세포술검측세포순도후분5조접충도6공판내:TNF-α자격hUC-MSC상청+불완전갑기섬유소배양기；hUC-MSC상청+불완전갑기섬유소배양기；TNF-α+DMEM/F12완전배양기+불완전갑기섬유소배양기；완전갑기섬유소배양기；DMEM/F12완전배양기+불완전갑기섬유소배양기.10 d후현미경하계수각류집락형성단위(colony-forming unit,CFU)적수목,수집집락형성세포,류식세포술검측기표형특정.결과:(1)TNF-α자격후hUC-MSCs중립세포집락자격인자(granulocyte colony-stimu-lating factor,G-CSF)화백세포개소6(interleukin-6,IL-6)mRNA표체상조.(2)량충조건배양조균가견립계CFU(granulocyte CFU,CFU-G)、거서계CFU(macrophage CFU,CFU-M)화립거서계CFU(granulocyte-macrophage CFU,CFU-GM),단TNF-α자격조CFU-G화CFU-M적수목약위미자격조적1.5배,CFU-GM약위미자격조적2배；양성대조조중제립계、거서계집락외환가견홍계집락；이DMEM/F12완전배양기가혹불가TNF-α조10 d후균미견집락형성.(3)류식세포술검측TNF-α자격조여미자격조집락세포표형CD14、CD45화CD11b,미견명현차이.결론:hUC-MSC상청작위조건배양기가재체외촉진CD34+세포분화증식위수계세포,구유조혈지지작용,TNF-α자격후차작용증강.