南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
5期
818-823
,共6页
马晓晓%李哲%戴雪梅%毕政鸿%方家林%黄华孙%李运合%贺永国
馬曉曉%李哲%戴雪梅%畢政鴻%方傢林%黃華孫%李運閤%賀永國
마효효%리철%대설매%필정홍%방가림%황화손%리운합%하영국
橡胶树%HbHMGR1基因%易碎愈伤组织%根癌农杆菌%遗传转化
橡膠樹%HbHMGR1基因%易碎愈傷組織%根癌農桿菌%遺傳轉化
상효수%HbHMGR1기인%역쇄유상조직%근암농간균%유전전화
Hevea brasiliensis%HbHMGR1%friable callus%Agrobacterium-tumefaciens%genetic transformation
[目的]克隆橡胶树HbHMGR1基因,转化橡胶树易碎愈伤组织,为橡胶树遗传转化和品种改良打下基础.[方法]根据已经报道的HbHMGR1基因序列(NCBI登录号X54659.1)设计特异引物,通过RT-PCR克隆HbHMGR1基因,构建pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1植物表达载体.再用EHA105(携带pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1,内含NPTⅡ和uidA基因)侵染橡胶树易碎愈伤组织,数月筛选后对抗性易碎愈伤组织系进行GUS染色和分子检测.[结果]成功克隆了HbHMGR1基因,双酶切重组质粒、重组质粒的PCR扩增结果证明成功地构建了该基因的植物表达载体pCAMBI-A2301-35S-HbHMGR1.侵染后抗性橡胶树易碎胚性愈伤组织GUS检测为蓝色,且分子检测呈现阳性,共获得15个抗性易碎愈伤组织系.[结论]橡胶树HbHMGR1基因在愈伤组织阶段开始表达,有效提高了HbHMGR1基因在橡胶中的表达量.
[目的]剋隆橡膠樹HbHMGR1基因,轉化橡膠樹易碎愈傷組織,為橡膠樹遺傳轉化和品種改良打下基礎.[方法]根據已經報道的HbHMGR1基因序列(NCBI登錄號X54659.1)設計特異引物,通過RT-PCR剋隆HbHMGR1基因,構建pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1植物錶達載體.再用EHA105(攜帶pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1,內含NPTⅡ和uidA基因)侵染橡膠樹易碎愈傷組織,數月篩選後對抗性易碎愈傷組織繫進行GUS染色和分子檢測.[結果]成功剋隆瞭HbHMGR1基因,雙酶切重組質粒、重組質粒的PCR擴增結果證明成功地構建瞭該基因的植物錶達載體pCAMBI-A2301-35S-HbHMGR1.侵染後抗性橡膠樹易碎胚性愈傷組織GUS檢測為藍色,且分子檢測呈現暘性,共穫得15箇抗性易碎愈傷組織繫.[結論]橡膠樹HbHMGR1基因在愈傷組織階段開始錶達,有效提高瞭HbHMGR1基因在橡膠中的錶達量.
[목적]극륭상효수HbHMGR1기인,전화상효수역쇄유상조직,위상효수유전전화화품충개량타하기출.[방법]근거이경보도적HbHMGR1기인서렬(NCBI등록호X54659.1)설계특이인물,통과RT-PCR극륭HbHMGR1기인,구건pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1식물표체재체.재용EHA105(휴대pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1,내함NPTⅡ화uidA기인)침염상효수역쇄유상조직,수월사선후대항성역쇄유상조직계진행GUS염색화분자검측.[결과]성공극륭료HbHMGR1기인,쌍매절중조질립、중조질립적PCR확증결과증명성공지구건료해기인적식물표체재체pCAMBI-A2301-35S-HbHMGR1.침염후항성상효수역쇄배성유상조직GUS검측위람색,차분자검측정현양성,공획득15개항성역쇄유상조직계.[결론]상효수HbHMGR1기인재유상조직계단개시표체,유효제고료HbHMGR1기인재상효중적표체량.
