解剖学报
解剖學報
해부학보
ACTA ANATOMICA SINICA
2014年
1期
109-113
,共5页
Smad3%卵巢颗粒细胞%自噬%免疫组织化学%免疫印迹法%大鼠
Smad3%卵巢顆粒細胞%自噬%免疫組織化學%免疫印跡法%大鼠
Smad3%란소과립세포%자서%면역조직화학%면역인적법%대서
Smad3%Ovarian granulosa cell%Autophagy%Immunohistochemistry%Western blotting%Rat
目的 探讨Smad3基因对大鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响.方法 21d SD雌性大鼠腹腔注射孕马血清20 IU/只,48h后收集卵巢颗粒细胞进行原代培养.培养细胞分为3组:空白对照组:培养液中不加任何处理因素;敲低实验组:培养液中加入Smad3基因特异性的SiRNA及转染试剂RNAiMAX;过表达实验组:培养液中加入Smad3真核表达质粒及转染试剂Lip0 2000.免疫细胞化学方法鉴定培养细胞纯度;Western blotting方法检测Smad3蛋白表达变化,检测转染效率.Smad3基因敲低及过表达后,Western blotting方法检测自噬体膜形成标志蛋白LC3B及自噬调控相关蛋白Bcl-2的蛋白表达变化.结果 Smad3敲低时,LC3B蛋白Ⅱ型与Ⅰ型的比值(LC3BⅡ/Ⅰ)变化不明显,Bcl-2蛋白表达明显降低;Smad3过表达时,LC3BⅡ/Ⅰ明显增加,Bcl-2蛋白表达明显增加.结论 Smad3基因特异的SiRNA及真核表达质粒可以有效地转入大鼠卵巢颗粒细胞中,Smad3基因促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬,其机制可能与Bcl-2蛋白相关.
目的 探討Smad3基因對大鼠卵巢顆粒細胞自噬的影響.方法 21d SD雌性大鼠腹腔註射孕馬血清20 IU/隻,48h後收集卵巢顆粒細胞進行原代培養.培養細胞分為3組:空白對照組:培養液中不加任何處理因素;敲低實驗組:培養液中加入Smad3基因特異性的SiRNA及轉染試劑RNAiMAX;過錶達實驗組:培養液中加入Smad3真覈錶達質粒及轉染試劑Lip0 2000.免疫細胞化學方法鑒定培養細胞純度;Western blotting方法檢測Smad3蛋白錶達變化,檢測轉染效率.Smad3基因敲低及過錶達後,Western blotting方法檢測自噬體膜形成標誌蛋白LC3B及自噬調控相關蛋白Bcl-2的蛋白錶達變化.結果 Smad3敲低時,LC3B蛋白Ⅱ型與Ⅰ型的比值(LC3BⅡ/Ⅰ)變化不明顯,Bcl-2蛋白錶達明顯降低;Smad3過錶達時,LC3BⅡ/Ⅰ明顯增加,Bcl-2蛋白錶達明顯增加.結論 Smad3基因特異的SiRNA及真覈錶達質粒可以有效地轉入大鼠卵巢顆粒細胞中,Smad3基因促進大鼠卵巢顆粒細胞自噬,其機製可能與Bcl-2蛋白相關.
목적 탐토Smad3기인대대서란소과립세포자서적영향.방법 21d SD자성대서복강주사잉마혈청20 IU/지,48h후수집란소과립세포진행원대배양.배양세포분위3조:공백대조조:배양액중불가임하처리인소;고저실험조:배양액중가입Smad3기인특이성적SiRNA급전염시제RNAiMAX;과표체실험조:배양액중가입Smad3진핵표체질립급전염시제Lip0 2000.면역세포화학방법감정배양세포순도;Western blotting방법검측Smad3단백표체변화,검측전염효솔.Smad3기인고저급과표체후,Western blotting방법검측자서체막형성표지단백LC3B급자서조공상관단백Bcl-2적단백표체변화.결과 Smad3고저시,LC3B단백Ⅱ형여Ⅰ형적비치(LC3BⅡ/Ⅰ)변화불명현,Bcl-2단백표체명현강저;Smad3과표체시,LC3BⅡ/Ⅰ명현증가,Bcl-2단백표체명현증가.결론 Smad3기인특이적SiRNA급진핵표체질립가이유효지전입대서란소과립세포중,Smad3기인촉진대서란소과립세포자서,기궤제가능여Bcl-2단백상관.
