南方农业学报
南方農業學報
남방농업학보
GUANGXI AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
5期
725-730
,共6页
陆坚%杜丽琴%庞浩%马贵%韦宇拓%黄日波
陸堅%杜麗琴%龐浩%馬貴%韋宇拓%黃日波
륙견%두려금%방호%마귀%위우탁%황일파
普鲁兰酶%宏基因组%16S rRNA%DNA文库%温泉土壤
普魯蘭酶%宏基因組%16S rRNA%DNA文庫%溫泉土壤
보로란매%굉기인조%16S rRNA%DNA문고%온천토양
pullulanase%metagenome%16S rRNA%DNA library%hot spring soil
[目的]构建温泉土壤宏基因组文库并进行普鲁兰酶活性筛选,以期获得高活力、耐高温的新型普鲁兰酶基因.[方法]采用间接法提取温泉土壤样品中宏基因组DNA,经Sephadex G200(含2％ PVPP)凝胶柱和电洗脱两步纯化后,扩增16S rRNA序列,通过序列比对和系统发育进化树分析温泉土壤微生物的多样性;然后以pCC1FOS为载体构建温泉土壤宏基因组文库,并对所获得的宏基因组文库进行活性筛选.[结果]利用宏基因组技术提取温泉土壤样品中微生物的基因组DNA,构建了一个约含1 146个克隆的温泉土壤16S rRNA文库,经遗传进化分析,发现温泉土壤样品中的大部分微生物未被研究过,主要来源于厚壁菌门(Firmicutes),其次为恐球菌—栖热菌门(Deinococcus-Thermus)和变形杆菌门(Proteobacteria).用提取获得的宏基因组DNA成功构建了温泉土壤微生物宏基因组Fosmid文库,文库约含2.7万个克隆,平均插入片段长度为40.0 kb,文库外源DNA总容量为1.2×109bp;通过活性筛选共获得9个可表达普鲁兰酶活性的克隆.[结论]宏基因组文库技术是获取极端环境微生物新酶的有效手段,可为进一步挖掘普鲁兰酶的应用潜力及研究其耐热机理奠定基础.
[目的]構建溫泉土壤宏基因組文庫併進行普魯蘭酶活性篩選,以期穫得高活力、耐高溫的新型普魯蘭酶基因.[方法]採用間接法提取溫泉土壤樣品中宏基因組DNA,經Sephadex G200(含2％ PVPP)凝膠柱和電洗脫兩步純化後,擴增16S rRNA序列,通過序列比對和繫統髮育進化樹分析溫泉土壤微生物的多樣性;然後以pCC1FOS為載體構建溫泉土壤宏基因組文庫,併對所穫得的宏基因組文庫進行活性篩選.[結果]利用宏基因組技術提取溫泉土壤樣品中微生物的基因組DNA,構建瞭一箇約含1 146箇剋隆的溫泉土壤16S rRNA文庫,經遺傳進化分析,髮現溫泉土壤樣品中的大部分微生物未被研究過,主要來源于厚壁菌門(Firmicutes),其次為恐毬菌—棲熱菌門(Deinococcus-Thermus)和變形桿菌門(Proteobacteria).用提取穫得的宏基因組DNA成功構建瞭溫泉土壤微生物宏基因組Fosmid文庫,文庫約含2.7萬箇剋隆,平均插入片段長度為40.0 kb,文庫外源DNA總容量為1.2×109bp;通過活性篩選共穫得9箇可錶達普魯蘭酶活性的剋隆.[結論]宏基因組文庫技術是穫取極耑環境微生物新酶的有效手段,可為進一步挖掘普魯蘭酶的應用潛力及研究其耐熱機理奠定基礎.
[목적]구건온천토양굉기인조문고병진행보로란매활성사선,이기획득고활력、내고온적신형보로란매기인.[방법]채용간접법제취온천토양양품중굉기인조DNA,경Sephadex G200(함2％ PVPP)응효주화전세탈량보순화후,확증16S rRNA서렬,통과서렬비대화계통발육진화수분석온천토양미생물적다양성;연후이pCC1FOS위재체구건온천토양굉기인조문고,병대소획득적굉기인조문고진행활성사선.[결과]이용굉기인조기술제취온천토양양품중미생물적기인조DNA,구건료일개약함1 146개극륭적온천토양16S rRNA문고,경유전진화분석,발현온천토양양품중적대부분미생물미피연구과,주요래원우후벽균문(Firmicutes),기차위공구균—서열균문(Deinococcus-Thermus)화변형간균문(Proteobacteria).용제취획득적굉기인조DNA성공구건료온천토양미생물굉기인조Fosmid문고,문고약함2.7만개극륭,평균삽입편단장도위40.0 kb,문고외원DNA총용량위1.2×109bp;통과활성사선공획득9개가표체보로란매활성적극륭.[결론]굉기인조문고기술시획취겁단배경미생물신매적유효수단,가위진일보알굴보로란매적응용잠력급연구기내열궤리전정기출.
