CAJ | 학술논문

目的:从线粒体途径探讨凉血化瘀方对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(D-GaIN)所致肝细胞凋亡的保护作用.方法:体外培养人正常肝L02细胞,用TNF-α(100 μg·L-1)和D-GaIN(44 mg·L-1)诱导肝细胞损伤模型,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；采用细胞增殖实验(MTT)法检测细胞活力；Annexin V-FITC/PI双染色法结合高内涵细胞成像系统检测肝细胞凋亡；罗丹明123(Rh123)染色结合高内涵分析系统检测线粒体跨膜电位；Western-blot检测线粒体途径凋亡标志蛋白凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)、细胞凋亡诱导因子(AIF)、胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)表达水平的变化.结果:与正常对照组相比,TNF-α和D-GalN可明显抑制L02肝细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞线粒体跨膜电位明显下降,并使促凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达显著增加.不同浓度的凉血化瘀方作用后,与TNF-α/GalN损伤组相比,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、减少细胞凋亡,抑制细胞线粒体跨膜电位的下降,并促使凋亡蛋白Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达量呈逐渐下降的趋势.结论:凉血化瘀方对TNF-α和D-GaIN所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与稳定线粒体的膜电位和下调促凋亡基因Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9的表达有关.
목적:종선립체도경탐토량혈화어방대종류배사인자α(TNF-α)화D-안기반유당(D-GaIN)소치간세포조망적보호작용.방법:체외배양인정상간L02세포,용TNF-α(100 μg·L-1)화D-GaIN(44 mg·L-1)유도간세포손상모형,형광현미경관찰세포조망적형태학변화；채용세포증식실험(MTT)법검측세포활력；Annexin V-FITC/PI쌍염색법결합고내함세포성상계통검측간세포조망；라단명123(Rh123)염색결합고내함분석계통검측선립체과막전위；Western-blot검측선립체도경조망표지단백조망단백매격활인자(Apaf-1)、세포조망유도인자(AIF)、광안산천동안산특이성단백매(cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9)표체수평적변화.결과:여정상대조조상비,TNF-α화D-GalN가명현억제L02간세포증식,유도세포조망,사세포선립체과막전위명현하강,병사촉조망단백Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9적표체현저증가.불동농도적량혈화어방작용후,여TNF-α/GalN손상조상비,가현저감경L02간세포적증식억제、감소세포조망,억제세포선립체과막전위적하강,병촉사조망단백Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9적표체량정축점하강적추세.결론:량혈화어방대TNF-α화D-GaIN소유도적간세포조망구유억제작용,기궤제가능여은정선립체적막전위화하조촉조망기인Apaf-1,AIF,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9적표체유관.