江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
4期
755-759
,共5页
张清霞%杨荣华%徐敬友%纪兆林%陈夕军%童蕴慧
張清霞%楊榮華%徐敬友%紀兆林%陳夕軍%童蘊慧
장청하%양영화%서경우%기조림%진석군%동온혜
粉红粘帚霉%β-1,3-葡聚糖酶%分离纯化
粉紅粘帚黴%β-1,3-葡聚糖酶%分離純化
분홍점추매%β-1,3-포취당매%분리순화
Gliocladium roseum%β-1,3-glucanase%purification
为明确粘帚霉GR-6产生的β-1,3-葡聚糖酶对植物病原真菌的作用机制,建立β-1,3-葡聚糖酶分离纯化体系,根据形态特征和ITS序列分析鉴定GR-6种类,用60％饱和度的丙酮沉淀酶蛋白质,再通过DE-52离子交换层析和Sephadex G-75凝胶柱层析纯化蛋白质.结果表明,GR-6菌株ITS序列与粉红粘帚霉的相似度最高,达到98％,结合形态学特征将该菌株鉴定为粉红粘帚霉.SDS-PAGE显示纯化后得到一种分子量为4.11×104的蛋白质,该蛋白质具有β-1,3-葡聚糖酶活性.经该酶处理后的水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)和棉花黄萎病菌(Verticilliun dahliae)菌丝颜色变浅、细胞轮廓变模糊、甚至菌丝细胞逐渐消失,可见,粉红粘帚霉GR-6产生的β-1,3-葡聚糖酶对这两种植物病原真菌菌丝有直接破坏作用.纯化后的β-1,3-葡聚糖酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为4,酶液在50℃以下或pH 5时保存0.5h,酶活性基本保持稳定;该葡聚糖酶对一些金属离子较敏感,其中Zn2+、Sn2+、Ca2+、Fe2+等使酶活性显著降低,而Mn2+和K+对酶活性没有明显的影响.建立的β-1,3-葡聚糖酶纯化体系稳定可靠.
為明確粘帚黴GR-6產生的β-1,3-葡聚糖酶對植物病原真菌的作用機製,建立β-1,3-葡聚糖酶分離純化體繫,根據形態特徵和ITS序列分析鑒定GR-6種類,用60％飽和度的丙酮沉澱酶蛋白質,再通過DE-52離子交換層析和Sephadex G-75凝膠柱層析純化蛋白質.結果錶明,GR-6菌株ITS序列與粉紅粘帚黴的相似度最高,達到98％,結閤形態學特徵將該菌株鑒定為粉紅粘帚黴.SDS-PAGE顯示純化後得到一種分子量為4.11×104的蛋白質,該蛋白質具有β-1,3-葡聚糖酶活性.經該酶處理後的水稻紋枯病菌(Rhizoctonia solani)和棉花黃萎病菌(Verticilliun dahliae)菌絲顏色變淺、細胞輪廓變模糊、甚至菌絲細胞逐漸消失,可見,粉紅粘帚黴GR-6產生的β-1,3-葡聚糖酶對這兩種植物病原真菌菌絲有直接破壞作用.純化後的β-1,3-葡聚糖酶的最適反應溫度為50℃,最適反應pH值為4,酶液在50℃以下或pH 5時保存0.5h,酶活性基本保持穩定;該葡聚糖酶對一些金屬離子較敏感,其中Zn2+、Sn2+、Ca2+、Fe2+等使酶活性顯著降低,而Mn2+和K+對酶活性沒有明顯的影響.建立的β-1,3-葡聚糖酶純化體繫穩定可靠.
위명학점추매GR-6산생적β-1,3-포취당매대식물병원진균적작용궤제,건립β-1,3-포취당매분리순화체계,근거형태특정화ITS서렬분석감정GR-6충류,용60％포화도적병동침정매단백질,재통과DE-52리자교환층석화Sephadex G-75응효주층석순화단백질.결과표명,GR-6균주ITS서렬여분홍점추매적상사도최고,체도98％,결합형태학특정장해균주감정위분홍점추매.SDS-PAGE현시순화후득도일충분자량위4.11×104적단백질,해단백질구유β-1,3-포취당매활성.경해매처리후적수도문고병균(Rhizoctonia solani)화면화황위병균(Verticilliun dahliae)균사안색변천、세포륜곽변모호、심지균사세포축점소실,가견,분홍점추매GR-6산생적β-1,3-포취당매대저량충식물병원진균균사유직접파배작용.순화후적β-1,3-포취당매적최괄반응온도위50℃,최괄반응pH치위4,매액재50℃이하혹pH 5시보존0.5h,매활성기본보지은정;해포취당매대일사금속리자교민감,기중Zn2+、Sn2+、Ca2+、Fe2+등사매활성현저강저,이Mn2+화K+대매활성몰유명현적영향.건립적β-1,3-포취당매순화체계은정가고.
