工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2013年
4期
1-8
,共8页
大肠杆菌%漆酶%选择性密码子优化%嗜热栖热菌
大腸桿菌%漆酶%選擇性密碼子優化%嗜熱棲熱菌
대장간균%칠매%선택성밀마자우화%기열서열균
Escherichia coli%laccase%selective codon optimization%Thermus thermophilus
通过对漆酶成熟肽编码序列的N端(Gln2-Val84)及中部一富含GC碱基区域(Gly278-Pro303)进行密码子优化,成功实现嗜热细菌嗜热栖热菌Thermus thermophilus HB27胞内产极耐热漆酶在大肠杆菌宿主内的超量表达,热激诱导表达后细胞提取液中漆酶活性从(20.7±1.5)U/L升高到(1790.2±81.6)U/L,重组蛋白表达水平提高了86倍.利用全蛋白的极端耐热性,采用两步纯化方法(85℃热预处理和疏水柱层析),获得电泳纯的重组酶蛋白,比酶活为14 U/mg,最终收率为62％.这是首次报道采用pHsh热激表达系统实现该极耐热性细菌漆酶在大肠杆菌宿主体内的高效表达.
通過對漆酶成熟肽編碼序列的N耑(Gln2-Val84)及中部一富含GC堿基區域(Gly278-Pro303)進行密碼子優化,成功實現嗜熱細菌嗜熱棲熱菌Thermus thermophilus HB27胞內產極耐熱漆酶在大腸桿菌宿主內的超量錶達,熱激誘導錶達後細胞提取液中漆酶活性從(20.7±1.5)U/L升高到(1790.2±81.6)U/L,重組蛋白錶達水平提高瞭86倍.利用全蛋白的極耑耐熱性,採用兩步純化方法(85℃熱預處理和疏水柱層析),穫得電泳純的重組酶蛋白,比酶活為14 U/mg,最終收率為62％.這是首次報道採用pHsh熱激錶達繫統實現該極耐熱性細菌漆酶在大腸桿菌宿主體內的高效錶達.
통과대칠매성숙태편마서렬적N단(Gln2-Val84)급중부일부함GC감기구역(Gly278-Pro303)진행밀마자우화,성공실현기열세균기열서열균Thermus thermophilus HB27포내산겁내열칠매재대장간균숙주내적초량표체,열격유도표체후세포제취액중칠매활성종(20.7±1.5)U/L승고도(1790.2±81.6)U/L,중조단백표체수평제고료86배.이용전단백적겁단내열성,채용량보순화방법(85℃열예처리화소수주층석),획득전영순적중조매단백,비매활위14 U/mg,최종수솔위62％.저시수차보도채용pHsh열격표체계통실현해겁내열성세균칠매재대장간균숙주체내적고효표체.
