棉花学报
棉花學報
면화학보
COTTON SCIENCE
2013年
5期
396-402
,共7页
谭永安%肖留斌%柏立新%孙洋
譚永安%肖留斌%柏立新%孫洋
담영안%초류빈%백립신%손양
绿盲蝽%膜结合型海藻糖酶%原核表达%酶学特性
綠盲蝽%膜結閤型海藻糖酶%原覈錶達%酶學特性
록맹춘%막결합형해조당매%원핵표체%매학특성
Apolygus lucorum%membrane-bound trehalase%prokaryotic expression%enzymatic characteristic
以绿盲蝽为材料,在前期获得绿盲蝽膜结合型海藻糖酶(ALTre-2)基因的基础上,构建了ALTre-2原核表达载体(pET28a-ALTre-2),经IPTG诱导表达、变性、复性和蛋白纯化后,获得具海藻糖酶活力的重组蛋白,最后在以海藻糖为底物及重组蛋白浓度为1.1 mg·mL-1的条件下,对纯化得到的重组ALTre-2蛋白进行活性检测,确定了其酶促反应的最佳pH和最适温度.试验结果表明:ALTre-2基因在大肠杆菌BL21(DE3)中能够高效表达一个约60 kD大小的蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及蛋白纯化获得了具海藻糖酶活力的重组蛋白;该重组ALTre-2蛋白在pH为7.0时活性最高,同时重组ALTre-2蛋白酶活性最适温度是50℃.研究结果为深入探讨绿盲蝽膜结合型海藻糖酶分子调控机制奠定基础.
以綠盲蝽為材料,在前期穫得綠盲蝽膜結閤型海藻糖酶(ALTre-2)基因的基礎上,構建瞭ALTre-2原覈錶達載體(pET28a-ALTre-2),經IPTG誘導錶達、變性、複性和蛋白純化後,穫得具海藻糖酶活力的重組蛋白,最後在以海藻糖為底物及重組蛋白濃度為1.1 mg·mL-1的條件下,對純化得到的重組ALTre-2蛋白進行活性檢測,確定瞭其酶促反應的最佳pH和最適溫度.試驗結果錶明:ALTre-2基因在大腸桿菌BL21(DE3)中能夠高效錶達一箇約60 kD大小的蛋白,SDS-PAGE顯示該蛋白以包涵體形式存在,經變性、複性及蛋白純化穫得瞭具海藻糖酶活力的重組蛋白;該重組ALTre-2蛋白在pH為7.0時活性最高,同時重組ALTre-2蛋白酶活性最適溫度是50℃.研究結果為深入探討綠盲蝽膜結閤型海藻糖酶分子調控機製奠定基礎.
이록맹춘위재료,재전기획득록맹춘막결합형해조당매(ALTre-2)기인적기출상,구건료ALTre-2원핵표체재체(pET28a-ALTre-2),경IPTG유도표체、변성、복성화단백순화후,획득구해조당매활력적중조단백,최후재이해조당위저물급중조단백농도위1.1 mg·mL-1적조건하,대순화득도적중조ALTre-2단백진행활성검측,학정료기매촉반응적최가pH화최괄온도.시험결과표명:ALTre-2기인재대장간균BL21(DE3)중능구고효표체일개약60 kD대소적단백,SDS-PAGE현시해단백이포함체형식존재,경변성、복성급단백순화획득료구해조당매활력적중조단백;해중조ALTre-2단백재pH위7.0시활성최고,동시중조ALTre-2단백매활성최괄온도시50℃.연구결과위심입탐토록맹춘막결합형해조당매분자조공궤제전정기출.
