CAJ | 학술논문

[目的]克隆广西巴马小型猪α干扰素基因(poIFN-α)全部编码序列并构建其哺乳动物真核表达载体,为研发重组猪干扰素类免疫佐剂及生物治疗制剂提供参考依据.[方法]应用RT-PCR扩增广西巴马小型猪poIFN-α编码序列,链接至pMD 18-T载体构建重组质粒,以测序正确的重组质粒为模板,PCR扩增带有酶切位点的poIFN-α基因,然后连接真核表达载体pTARGET构建重组表达载体pTARGET-poIFN-α,并转化感受态细胞DH5α,经双酶切初步鉴定正确后送至北京诺赛生物有限公司测序,用DNASTAR软件及Primer Premer 5.0等对获得的基因序列进行分析.[结果]以广西巴马小型猪总RNA为模板扩增获得的目的片段为618 bp,包含poIFN-α基因全部编码序列;将克隆获得的poIFN-α基因插入哺乳动物真核表达载体pTARGET中,可成功构建广西巴马小型猪重组表达载体pTAR-GET-poIFN-α.广西巴马小型猪poIFN-α与GenBank上已发表的猪、鼠、人IFN-α基因同源性分别为97.0％、78.2％和66.3％;其成熟肽与普通猪相比,共有17个位点发生碱基突变,其中第63、189、198、288、544、545位点为无义突变,第88、119、163、182、186、195、263、301、306、553、560位点为错义突变.[结论]IFN-α成熟肽在哺乳动物中保守性较差;克隆获得的广西巴马小型猪poIFN-α基因能成功插入哺乳动物真核表达载体pTARGET中构建重组表达载体pTAR-GET-poIFN-α,为研发重组猪干扰素类生物治疗制剂、免疫佐剂、构建小型猪疾病动物模型等奠定了基础.
[목적]극륭엄서파마소형저α간우소기인(poIFN-α)전부편마서렬병구건기포유동물진핵표체재체,위연발중조저간우소류면역좌제급생물치료제제제공삼고의거.[방법]응용RT-PCR확증엄서파마소형저poIFN-α편마서렬,련접지pMD 18-T재체구건중조질립,이측서정학적중조질립위모판,PCR확증대유매절위점적poIFN-α기인,연후련접진핵표체재체pTARGET구건중조표체재체pTARGET-poIFN-α,병전화감수태세포DH5α,경쌍매절초보감정정학후송지북경낙새생물유한공사측서,용DNASTAR연건급Primer Premer 5.0등대획득적기인서렬진행분석.[결과]이엄서파마소형저총RNA위모판확증획득적목적편단위618 bp,포함poIFN-α기인전부편마서렬;장극륭획득적poIFN-α기인삽입포유동물진핵표체재체pTARGET중,가성공구건엄서파마소형저중조표체재체pTAR-GET-poIFN-α.엄서파마소형저poIFN-α여GenBank상이발표적저、서、인IFN-α기인동원성분별위97.0％、78.2％화66.3％;기성숙태여보통저상비,공유17개위점발생감기돌변,기중제63、189、198、288、544、545위점위무의돌변,제88、119、163、182、186、195、263、301、306、553、560위점위착의돌변.[결론]IFN-α성숙태재포유동물중보수성교차;극륭획득적엄서파마소형저poIFN-α기인능성공삽입포유동물진핵표체재체pTARGET중구건중조표체재체pTAR-GET-poIFN-α,위연발중조저간우소류생물치료제제、면역좌제、구건소형저질병동물모형등전정료기출.