目的:探讨股密葆含药血清对成骨细胞分化成熟的影响及其作用机制.方法:将20只2月龄雌性SD大鼠随机分成4组,对照组8只,高、中、低浓度股密葆组各4只.对照组按10 mL·kg-1体质量以生理盐水灌胃,高浓度组按10 mL·kg-1体质量以2 430 mg· mL-1股密葆混悬液灌胃,中浓度组按10 mL·kg-1体质量以1 215 mg· mL-1股密葆混悬液灌胃,低浓度组按10mL·kg-1体质量以607.5 mg· mL-1股密葆混悬液灌胃.每天灌胃1次,连续3d.末次灌胃后lh提取各组实验大鼠含药血清,低温保存备用.将10只新生SD大鼠处死,取其颅骨,采用多次酶消化法分离出成骨细胞.将第1代成骨细胞分别在含有对照组大鼠血清及高、中、低浓度股密葆含药血清的培养基中培养1周后,采用染色法检测碱性磷酸酶表达情况,采用Western Blotting法检测Ⅰ型胶原、Runt相关转录因子2、β连环素及转录因子4的蛋白表达情况.结果:①成骨细胞中碱性磷酸酶的表达.与对照组比较,各浓度股密葆含药血清组碱性磷酸酶染色较深,其中中浓度组染色最深.②成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白的表达.对照组、高浓度组、中浓度组、低浓度组Ⅰ型胶原蛋白的表达量比较,差异有统计学意义[(1.172±0.047),(2.023±0.131),(2.792±0.737),(2.235±0.525),F=6.466,P=0.016].组间两两比较,中浓度组、低浓度组高于对照组(P=0.003,P=0.022);高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.052);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).③成骨细胞中Runt相关转录因子2蛋白的表达.各组Runt相关转录因子2蛋白的表达量比较,差异有统计学意义[(1.968±0.263),(2.255±0.286),(2.675±0.181),(2.652±0.211),F=6.066,P=0.019].组间两两比较,中浓度组、低浓度组高于对照组(P=0.007,P=0.008);高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.180);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).④成骨细胞中β连环蛋白的表达.各组β连环蛋白表达量比较,差异有统计学意义[(1.571±0.140),(2.264±0.265),(2.783±0.432),(2.860±0.576),F=6.980,P=0.013].组间两两比较,中、低浓度组均高于对照组(P =0.005,P=0.004);高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.061);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).⑤成骨细胞中转录因子4蛋白的表达.各组转录因子4蛋白表达量比较,差异有统计学意义[(3.268±0.298),(3.941±0.360),(4.446±0.443),(4.186±0.249),F=6.431,P=0.016].组间两两比较,高、中、低浓度组均高于对照组(P=0.044,P=0.003,P=0.012);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:适当浓度股密葆含药血清可促进成骨细胞的分化,其作用机制或许与Wnt/β连环素信号通路的激活有关.
目的:探討股密葆含藥血清對成骨細胞分化成熟的影響及其作用機製.方法:將20隻2月齡雌性SD大鼠隨機分成4組,對照組8隻,高、中、低濃度股密葆組各4隻.對照組按10 mL·kg-1體質量以生理鹽水灌胃,高濃度組按10 mL·kg-1體質量以2 430 mg· mL-1股密葆混懸液灌胃,中濃度組按10 mL·kg-1體質量以1 215 mg· mL-1股密葆混懸液灌胃,低濃度組按10mL·kg-1體質量以607.5 mg· mL-1股密葆混懸液灌胃.每天灌胃1次,連續3d.末次灌胃後lh提取各組實驗大鼠含藥血清,低溫保存備用.將10隻新生SD大鼠處死,取其顱骨,採用多次酶消化法分離齣成骨細胞.將第1代成骨細胞分彆在含有對照組大鼠血清及高、中、低濃度股密葆含藥血清的培養基中培養1週後,採用染色法檢測堿性燐痠酶錶達情況,採用Western Blotting法檢測Ⅰ型膠原、Runt相關轉錄因子2、β連環素及轉錄因子4的蛋白錶達情況.結果:①成骨細胞中堿性燐痠酶的錶達.與對照組比較,各濃度股密葆含藥血清組堿性燐痠酶染色較深,其中中濃度組染色最深.②成骨細胞中Ⅰ型膠原蛋白的錶達.對照組、高濃度組、中濃度組、低濃度組Ⅰ型膠原蛋白的錶達量比較,差異有統計學意義[(1.172±0.047),(2.023±0.131),(2.792±0.737),(2.235±0.525),F=6.466,P=0.016].組間兩兩比較,中濃度組、低濃度組高于對照組(P=0.003,P=0.022);高濃度組與對照組比較,差異無統計學意義(P=0.052);其餘各組間比較,差異均無統計學意義(P＞0.05).③成骨細胞中Runt相關轉錄因子2蛋白的錶達.各組Runt相關轉錄因子2蛋白的錶達量比較,差異有統計學意義[(1.968±0.263),(2.255±0.286),(2.675±0.181),(2.652±0.211),F=6.066,P=0.019].組間兩兩比較,中濃度組、低濃度組高于對照組(P=0.007,P=0.008);高濃度組與對照組比較,差異無統計學意義(P=0.180);其餘各組間比較,差異均無統計學意義(P＞0.05).④成骨細胞中β連環蛋白的錶達.各組β連環蛋白錶達量比較,差異有統計學意義[(1.571±0.140),(2.264±0.265),(2.783±0.432),(2.860±0.576),F=6.980,P=0.013].組間兩兩比較,中、低濃度組均高于對照組(P =0.005,P=0.004);高濃度組與對照組比較,差異無統計學意義(P=0.061);其餘各組間比較,差異均無統計學意義(P＞0.05).⑤成骨細胞中轉錄因子4蛋白的錶達.各組轉錄因子4蛋白錶達量比較,差異有統計學意義[(3.268±0.298),(3.941±0.360),(4.446±0.443),(4.186±0.249),F=6.431,P=0.016].組間兩兩比較,高、中、低濃度組均高于對照組(P=0.044,P=0.003,P=0.012);其餘各組間比較,差異均無統計學意義(P＞0.05).結論:適噹濃度股密葆含藥血清可促進成骨細胞的分化,其作用機製或許與Wnt/β連環素信號通路的激活有關.
목적:탐토고밀보함약혈청대성골세포분화성숙적영향급기작용궤제.방법:장20지2월령자성SD대서수궤분성4조,대조조8지,고、중、저농도고밀보조각4지.대조조안10 mL·kg-1체질량이생리염수관위,고농도조안10 mL·kg-1체질량이2 430 mg· mL-1고밀보혼현액관위,중농도조안10 mL·kg-1체질량이1 215 mg· mL-1고밀보혼현액관위,저농도조안10mL·kg-1체질량이607.5 mg· mL-1고밀보혼현액관위.매천관위1차,련속3d.말차관위후lh제취각조실험대서함약혈청,저온보존비용.장10지신생SD대서처사,취기로골,채용다차매소화법분리출성골세포.장제1대성골세포분별재함유대조조대서혈청급고、중、저농도고밀보함약혈청적배양기중배양1주후,채용염색법검측감성린산매표체정황,채용Western Blotting법검측Ⅰ형효원、Runt상관전록인자2、β련배소급전록인자4적단백표체정황.결과:①성골세포중감성린산매적표체.여대조조비교,각농도고밀보함약혈청조감성린산매염색교심,기중중농도조염색최심.②성골세포중Ⅰ형효원단백적표체.대조조、고농도조、중농도조、저농도조Ⅰ형효원단백적표체량비교,차이유통계학의의[(1.172±0.047),(2.023±0.131),(2.792±0.737),(2.235±0.525),F=6.466,P=0.016].조간량량비교,중농도조、저농도조고우대조조(P=0.003,P=0.022);고농도조여대조조비교,차이무통계학의의(P=0.052);기여각조간비교,차이균무통계학의의(P＞0.05).③성골세포중Runt상관전록인자2단백적표체.각조Runt상관전록인자2단백적표체량비교,차이유통계학의의[(1.968±0.263),(2.255±0.286),(2.675±0.181),(2.652±0.211),F=6.066,P=0.019].조간량량비교,중농도조、저농도조고우대조조(P=0.007,P=0.008);고농도조여대조조비교,차이무통계학의의(P=0.180);기여각조간비교,차이균무통계학의의(P＞0.05).④성골세포중β련배단백적표체.각조β련배단백표체량비교,차이유통계학의의[(1.571±0.140),(2.264±0.265),(2.783±0.432),(2.860±0.576),F=6.980,P=0.013].조간량량비교,중、저농도조균고우대조조(P =0.005,P=0.004);고농도조여대조조비교,차이무통계학의의(P=0.061);기여각조간비교,차이균무통계학의의(P＞0.05).⑤성골세포중전록인자4단백적표체.각조전록인자4단백표체량비교,차이유통계학의의[(3.268±0.298),(3.941±0.360),(4.446±0.443),(4.186±0.249),F=6.431,P=0.016].조간량량비교,고、중、저농도조균고우대조조(P=0.044,P=0.003,P=0.012);기여각조간비교,차이균무통계학의의(P＞0.05).결론:괄당농도고밀보함약혈청가촉진성골세포적분화,기작용궤제혹허여Wnt/β련배소신호통로적격활유관.
