黑龙江农业科学
黑龍江農業科學
흑룡강농업과학
HEILONGJINAG AGRICULTURAL SCIENCE
2013年
9期
17-21,27
,共6页
王鹏%张振宇%马玲玲%马育珠%杨如同%李亚
王鵬%張振宇%馬玲玲%馬育珠%楊如同%李亞
왕붕%장진우%마령령%마육주%양여동%리아
紫薇%SSR-PCR%体系优化%引物筛选
紫薇%SSR-PCR%體繫優化%引物篩選
자미%SSR-PCR%체계우화%인물사선
L agerstroemia indica L .%SSR-PCR%system optimization%primers screening
为加强紫薇分子遗传学研究,以紫薇叶片DNA为模板,采用4因素(模板浓度、dNTP、引物浓度、酶浓度)3水平的L9(34)正交设计,优化紫薇的SSR-PCR反应体系,并对24对紫薇SSR引物进行了筛选。结果表明:紫薇10μLSSR-PCR的最优反应体系为:Taq酶0.2 U、Mg2+2.5 mmol·L-1、dNTP 0.15 mmol·L-1、F-primer 0.25 mmol·L-1、R-primer 0.25 mmol·L-1、DNA 60 ng ,ddH2 O补至10μL ;24对EST-SSR引物筛选出可扩增出条带的引物23对,其中16对具有多态性,共扩增出清晰条带68条,差异条带39条。
為加彊紫薇分子遺傳學研究,以紫薇葉片DNA為模闆,採用4因素(模闆濃度、dNTP、引物濃度、酶濃度)3水平的L9(34)正交設計,優化紫薇的SSR-PCR反應體繫,併對24對紫薇SSR引物進行瞭篩選。結果錶明:紫薇10μLSSR-PCR的最優反應體繫為:Taq酶0.2 U、Mg2+2.5 mmol·L-1、dNTP 0.15 mmol·L-1、F-primer 0.25 mmol·L-1、R-primer 0.25 mmol·L-1、DNA 60 ng ,ddH2 O補至10μL ;24對EST-SSR引物篩選齣可擴增齣條帶的引物23對,其中16對具有多態性,共擴增齣清晰條帶68條,差異條帶39條。
위가강자미분자유전학연구,이자미협편DNA위모판,채용4인소(모판농도、dNTP、인물농도、매농도)3수평적L9(34)정교설계,우화자미적SSR-PCR반응체계,병대24대자미SSR인물진행료사선。결과표명:자미10μLSSR-PCR적최우반응체계위:Taq매0.2 U、Mg2+2.5 mmol·L-1、dNTP 0.15 mmol·L-1、F-primer 0.25 mmol·L-1、R-primer 0.25 mmol·L-1、DNA 60 ng ,ddH2 O보지10μL ;24대EST-SSR인물사선출가확증출조대적인물23대,기중16대구유다태성,공확증출청석조대68조,차이조대39조。
In order to further research the molecular markers of L agerstroemia indica L .,taking DNA of L a-gerstroemia indica L .as template ,several important parameters influencing SSR-PCR amplification were stud-ied with an orthogonal design by four factors and three levels ,as to establish the optimum SSR-PCR reaction system ,and the primers were screened from 24 pairs of SSR primers .The results showed that the optimal SSR-PCR reaction system was established as a total volume of 10 μL including Taq DNA polymerase 0 .2 U ,Mg2+2 .5 mmol·L-1 ,dNTPs 0 .15 mmol·L-1 ,0 .25 mmol·L-1 of each primer and template DNA 60 ng ,deionized water to 10 μL .23 pairs of available primers were screened from 24 pairs of EST-SSR primers ,there were 16 pairs of polymorphism primers amplified out 68 clear bands ,39 bands with differences .