中国预防兽医学报
中國預防獸醫學報
중국예방수의학보
CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
2014年
5期
387-390
,共4页
孙晶%孙恩成%刘二战%孙亮%徐青元%杨涛%吴东来
孫晶%孫恩成%劉二戰%孫亮%徐青元%楊濤%吳東來
손정%손은성%류이전%손량%서청원%양도%오동래
蓝舌病病毒3型%VP5蛋白%单克隆抗体%抗原表位
藍舌病病毒3型%VP5蛋白%單剋隆抗體%抗原錶位
람설병병독3형%VP5단백%단극륭항체%항원표위
bluetongue virus serotype 3%VP5 protein%monoclonal antibody%antigen epitope
为制备血清3型蓝舌病病毒(BTV)VP5蛋白的单克隆抗体(MAb)及鉴定其抗原表位,本研究利用pMAL-C4x原核表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0细胞进行融合,并以Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达、纯化的重组VP5蛋白为包被抗原,通过间接ELISA筛选出一株稳定分泌抗BTV3 VP5蛋白的MAb杂交瘤细胞株(3F2).间接免疫荧光结果表明:MAb 3F2与BTV3、BTV5、BTV9、BTV 16呈阳性反应;与BTV6、BTV7、BTV13、BTV21呈弱阳性反应;与其它BTV血清型均呈阴性反应.利用原核表达的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合短肽对MAb 3F2识别的抗原表位进行鉴定,结果表明:该MAb识别的抗原表位为89PGERGIQMKIKEIEEE104.氨基酸序列比对结果显示该表位在不同地域来源的BTV3株间比较保守.该MAb的制备和鉴定为进一步研究VP5蛋白的结构和功能奠定了基础.
為製備血清3型藍舌病病毒(BTV)VP5蛋白的單剋隆抗體(MAb)及鑒定其抗原錶位,本研究利用pMAL-C4x原覈錶達繫統錶達、純化的重組VP5蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴細胞與SP2/0細胞進行融閤,併以Bac-to-Bac昆蟲桿狀病毒錶達繫統錶達、純化的重組VP5蛋白為包被抗原,通過間接ELISA篩選齣一株穩定分泌抗BTV3 VP5蛋白的MAb雜交瘤細胞株(3F2).間接免疫熒光結果錶明:MAb 3F2與BTV3、BTV5、BTV9、BTV 16呈暘性反應;與BTV6、BTV7、BTV13、BTV21呈弱暘性反應;與其它BTV血清型均呈陰性反應.利用原覈錶達的麥芽糖結閤蛋白(MBP)融閤短肽對MAb 3F2識彆的抗原錶位進行鑒定,結果錶明:該MAb識彆的抗原錶位為89PGERGIQMKIKEIEEE104.氨基痠序列比對結果顯示該錶位在不同地域來源的BTV3株間比較保守.該MAb的製備和鑒定為進一步研究VP5蛋白的結構和功能奠定瞭基礎.
위제비혈청3형람설병병독(BTV)VP5단백적단극륭항체(MAb)급감정기항원표위,본연구이용pMAL-C4x원핵표체계통표체、순화적중조VP5단백면역BALB/c소서,취기비림파세포여SP2/0세포진행융합,병이Bac-to-Bac곤충간상병독표체계통표체、순화적중조VP5단백위포피항원,통과간접ELISA사선출일주은정분비항BTV3 VP5단백적MAb잡교류세포주(3F2).간접면역형광결과표명:MAb 3F2여BTV3、BTV5、BTV9、BTV 16정양성반응;여BTV6、BTV7、BTV13、BTV21정약양성반응;여기타BTV혈청형균정음성반응.이용원핵표체적맥아당결합단백(MBP)융합단태대MAb 3F2식별적항원표위진행감정,결과표명:해MAb식별적항원표위위89PGERGIQMKIKEIEEE104.안기산서렬비대결과현시해표위재불동지역래원적BTV3주간비교보수.해MAb적제비화감정위진일보연구VP5단백적결구화공능전정료기출.
