CAJ | 학술논문

目的：构建PTEN原核融合质粒，利用原核表达体系表达PTEN蛋白。方法：从人新鲜外周血中提取总RNA，采用逆转录和聚合酶链反应等分子生物学技术扩增PTEN编码区基因，并将其pET32a质粒融合，化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将鉴定正确的pET32a-PTEN融合质粒转化入表达菌株BL21，通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导其蛋白表达，SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况。结果：菌落PCR及DNA测序证实目的基因与质粒完整融合；融合质粒成功转入表达菌株BL21（DE3），SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出73 kDa左右的蛋白。结论：成功构建融合质粒，并且PTEN全长蛋白在原核表达菌BL21中完整、高效表达。
목적：구건PTEN원핵융합질립，이용원핵표체체계표체PTEN단백。방법：종인신선외주혈중제취총RNA，채용역전록화취합매련반응등분자생물학기술확증PTEN편마구기인，병장기pET32a질립융합，화학법전화대장간균DH5α진행극륭。장감정정학적pET32a-PTEN융합질립전화입표체균주BL21，통과이병기-β-D-류대반유당감（IPTG）유도기단백표체，SDS-PAGE화Western-Blot감정단백표체정황。결과：균락PCR급DNA측서증실목적기인여질립완정융합；융합질립성공전입표체균주BL21（DE3），SDS-PAGE화Western-Blot결과현시표체균경IPTG유도후표체출73 kDa좌우적단백。결론：성공구건융합질립，병차PTEN전장단백재원핵표체균BL21중완정、고효표체。