中国脊柱脊髓杂志
中國脊柱脊髓雜誌
중국척주척수잡지
CHINESE JOURNAL OF SPINE AND SPINAL CORD
2014年
7期
630-637
,共8页
黄克伦%滕红林%黄卡特%戴宇森%陈毕%黄智慧%陈必成
黃剋倫%滕紅林%黃卡特%戴宇森%陳畢%黃智慧%陳必成
황극륜%등홍림%황잡특%대우삼%진필%황지혜%진필성
脊髓损伤%P27kip1%Jab1%胶质瘢痕
脊髓損傷%P27kip1%Jab1%膠質瘢痕
척수손상%P27kip1%Jab1%효질반흔
Spinal cord injury%P27kip1%Jab1%Glial scar
目的：观察大鼠脊髓损伤过程中P27kip1及相关分子Jab1在脊髓中的表达及细胞定位情况，探讨其在脊髓损伤后胶质细胞增生及胶质瘢痕生成中的作用。方法：取56只雄性SD大鼠，随机分为实验组与对照组，其中实验组按脊髓损伤时间分为6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d组，实验组按照Allen′s法制作SD大鼠脊髓损伤模型，对照组则仅打开椎板，不损伤脊髓。首先利用Western Blot观察P27kip1及相关分子Jab1在脊髓损伤后的表达水平变化，然后利用免疫组化观察脊髓损伤后3d时的P27kip1及5d时Jab1的阳性细胞表达变化，最后利用免疫荧光双标观察脊髓损伤后5d时Jab1的细胞定位变化。结果：Western Blot结果显示P27kip1在脊髓损伤后6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d组的相对灰度值分别是1.00±0.10、0.82±0.05、0.27±0.03、0.34±0.03、0.25±0.02、0.28±0.03、0.57±0.05，其中1d、3d、5d、7d、14d 组与对照组（0.98±0.08）相比均明显降低（P<0.05），而 Jab1的6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d 组的相对灰度值分别是0.58±0.08、0.53±0.04、0.89±0.11、1.06±0.24、1.22±0.26、0.85±0.16、0.25±0.03，其中6h、12h、1d、3d、5d、7d组与对照组（0.19±0.04）相比明显升高（P<0.05），P27kip1于脊髓损伤后表达下降，Jab1在脊髓损伤后表达上升。3d时实验组P27kip1免疫组化阳性细胞数为130.8±29.8个，与对照组（406.8±56.6个）相比减少（P<0.05）；5d时实验组Jab1免疫组化阳性细胞数为383.5±68.8个，与对照组（123.5±42.6个）相比增多（P<0.05），从形态学上进一步证明了这种变化。在免疫荧光双标实验中，5d时实验组Jab1与GFAP双阳性细胞数量为383.3±39.1个，较对照组（114.3±35.6个）明显增多（P<0.05）。结论：在大鼠脊髓损伤中，Jab1与P27kip1存在相互作用，Jab1参与脊髓损伤后P27kip1的降解，这可能与脊髓损伤后星形胶质细胞的过度增殖及胶质瘢痕的生成相关。
目的：觀察大鼠脊髓損傷過程中P27kip1及相關分子Jab1在脊髓中的錶達及細胞定位情況，探討其在脊髓損傷後膠質細胞增生及膠質瘢痕生成中的作用。方法：取56隻雄性SD大鼠，隨機分為實驗組與對照組，其中實驗組按脊髓損傷時間分為6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d組，實驗組按照Allen′s法製作SD大鼠脊髓損傷模型，對照組則僅打開椎闆，不損傷脊髓。首先利用Western Blot觀察P27kip1及相關分子Jab1在脊髓損傷後的錶達水平變化，然後利用免疫組化觀察脊髓損傷後3d時的P27kip1及5d時Jab1的暘性細胞錶達變化，最後利用免疫熒光雙標觀察脊髓損傷後5d時Jab1的細胞定位變化。結果：Western Blot結果顯示P27kip1在脊髓損傷後6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d組的相對灰度值分彆是1.00±0.10、0.82±0.05、0.27±0.03、0.34±0.03、0.25±0.02、0.28±0.03、0.57±0.05，其中1d、3d、5d、7d、14d 組與對照組（0.98±0.08）相比均明顯降低（P<0.05），而 Jab1的6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d 組的相對灰度值分彆是0.58±0.08、0.53±0.04、0.89±0.11、1.06±0.24、1.22±0.26、0.85±0.16、0.25±0.03，其中6h、12h、1d、3d、5d、7d組與對照組（0.19±0.04）相比明顯升高（P<0.05），P27kip1于脊髓損傷後錶達下降，Jab1在脊髓損傷後錶達上升。3d時實驗組P27kip1免疫組化暘性細胞數為130.8±29.8箇，與對照組（406.8±56.6箇）相比減少（P<0.05）；5d時實驗組Jab1免疫組化暘性細胞數為383.5±68.8箇，與對照組（123.5±42.6箇）相比增多（P<0.05），從形態學上進一步證明瞭這種變化。在免疫熒光雙標實驗中，5d時實驗組Jab1與GFAP雙暘性細胞數量為383.3±39.1箇，較對照組（114.3±35.6箇）明顯增多（P<0.05）。結論：在大鼠脊髓損傷中，Jab1與P27kip1存在相互作用，Jab1參與脊髓損傷後P27kip1的降解，這可能與脊髓損傷後星形膠質細胞的過度增殖及膠質瘢痕的生成相關。
목적：관찰대서척수손상과정중P27kip1급상관분자Jab1재척수중적표체급세포정위정황，탐토기재척수손상후효질세포증생급효질반흔생성중적작용。방법：취56지웅성SD대서，수궤분위실험조여대조조，기중실험조안척수손상시간분위6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d조，실험조안조Allen′s법제작SD대서척수손상모형，대조조칙부타개추판，불손상척수。수선이용Western Blot관찰P27kip1급상관분자Jab1재척수손상후적표체수평변화，연후이용면역조화관찰척수손상후3d시적P27kip1급5d시Jab1적양성세포표체변화，최후이용면역형광쌍표관찰척수손상후5d시Jab1적세포정위변화。결과：Western Blot결과현시P27kip1재척수손상후6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d조적상대회도치분별시1.00±0.10、0.82±0.05、0.27±0.03、0.34±0.03、0.25±0.02、0.28±0.03、0.57±0.05，기중1d、3d、5d、7d、14d 조여대조조（0.98±0.08）상비균명현강저（P<0.05），이 Jab1적6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d 조적상대회도치분별시0.58±0.08、0.53±0.04、0.89±0.11、1.06±0.24、1.22±0.26、0.85±0.16、0.25±0.03，기중6h、12h、1d、3d、5d、7d조여대조조（0.19±0.04）상비명현승고（P<0.05），P27kip1우척수손상후표체하강，Jab1재척수손상후표체상승。3d시실험조P27kip1면역조화양성세포수위130.8±29.8개，여대조조（406.8±56.6개）상비감소（P<0.05）；5d시실험조Jab1면역조화양성세포수위383.5±68.8개，여대조조（123.5±42.6개）상비증다（P<0.05），종형태학상진일보증명료저충변화。재면역형광쌍표실험중，5d시실험조Jab1여GFAP쌍양성세포수량위383.3±39.1개，교대조조（114.3±35.6개）명현증다（P<0.05）。결론：재대서척수손상중，Jab1여P27kip1존재상호작용，Jab1삼여척수손상후P27kip1적강해，저가능여척수손상후성형효질세포적과도증식급효질반흔적생성상관。
Objectives: To investigate the expression and distribution of P27kip1 and Jab1 in SD rat mod-els with spinal cord injury(SCI), to explore their functions in the process of spinal cord injury and prolifera-tion of astrocytes followed immediately. Methods: 56 male Sprague-Dawley(SD) rats were randomly divided in-to two groups: sham group(simple vertebra excision) and spinal cord injury group. And the rats in spinal cord injury group were divided into 6h, 12h, 1d, 3d, 5d, 7d, 14d groups according to the length of time of injury. The adult SD rat SCI models were established by using improved Allen′s method, T9 level of spinal cord was chosen to induce injury. First of all, the temporal expression of P27kip and Jab1 were detected by Western Blot. Then, the P27kip1 positive cell number in 3d group and Jab1 positive cell number in 5d were counted in immunohistochemistry. At the last, the change of cellular localization of Jab1 in 5d group was observed by immunofluorescence. Results: The Western Blot result showed the relative grey value of P27kip1 in 6h, 12h, 1d, 3d, 5d, 7d, 14d groups was 1.00±0.10, 0.82±0.05, 0.27±0.03, 0.34±0.03, 0.25±0.02, 0.28±0.03, 0.57±0.05 respectively, and the 1d, 3d, 5d, 7d, 14d group had obviously lower value than sham group(P<0.05). On the contrary, the relative grey value of Jab1 in 6h, 12h, 1d, 3d, 5d, 7d, 14d groups was 0.58±0.08, 0.53±0.04, 0.89±0.11, 1.06±0.24, 1.22±0.26, 0.85±0.16, 0.25±0.03 respectively, and the 6h, 12h, 1d, 3d, 5d, 7d groups had higher value than sham group (P<0.05). And the positive cell number in 3d spinal cord injury and P27kip1 group was 130.8±29.8, which was lower than sham group(406.8±56.6)(P<0.05). The positive cell num-ber of 5d spinal cord injury and Jab1 group was 383.5±68.8, which was higher than sham group(123.5±42.6) (P<0.05). Moreover, double labeling immunofluorescence of 5d Jab1 group presented that the Jab1 and GFAP double positive cell number was significantly more than that of the sham group (spinal cord injury group:383.3±39.1, sham group: 114.3±35.6, P<0.05). Conclusions: The up regulation of Jab1 is related to the degradation of P27kip1 in spinal cord injury of rats, which may be involved in the excessive proliferation of astrocytes.
