CAJ | 학술논문

目的：人血管内皮生长因子（的hVEGF165）为靶基因，增强型绿色荧光蛋白（ EGFP ）基因构建体的复制缺陷型腺病毒载体，为基因治疗牙周进一步再生奠定了基础。方法质粒的pDC316-的VEGF165为模板， PCR扩增基因片段进行消化，获得的hVEGF165用于连接到含有绿色荧光蛋白标记基因重组质粒的消化方法的pDC316-MCMV-EGFP质粒载体， PCR鉴定和双酶切证实成功构建重组质粒；使用ADMAX包装系统，改造的质粒共转染用质粒骨架293包装细胞系和重组病毒的扩增；扩增病毒的离子交换纯化； TCID50测定病毒粒子和效价的数目；的荧光的荧光显微镜重组腺病毒表达。结果 PCR鉴定，酶切分析和测序证实成功构建人VEGF基因的携带绿色荧光蛋白标记（的hVEGF165）重组质粒的pDC316-的hVEGF165-MCMV-EGFP和同源重组腺病毒Ad5的-的hVEGF165-EGFP的成功。扩增和纯化后，腺病毒颗粒的数量测量5.4×1011 VP/mL，约2.0，为1.8×1010CCID50/mL的滴度OD260/OD280值。结论成功构建携带hVEGF165基因重组腺病毒载体Ad5-hVEGF165-EGFP并获得高滴度病毒颗粒，为hVEGF165基因功能研究以及细胞移植、基因治疗提供有效的工具。
목적：인혈관내피생장인자（적hVEGF165）위파기인，증강형록색형광단백（ EGFP ）기인구건체적복제결함형선병독재체，위기인치료아주진일보재생전정료기출。방법질립적pDC316-적VEGF165위모판， PCR확증기인편단진행소화，획득적hVEGF165용우련접도함유록색형광단백표기기인중조질립적소화방법적pDC316-MCMV-EGFP질립재체， PCR감정화쌍매절증실성공구건중조질립；사용ADMAX포장계통，개조적질립공전염용질립골가293포장세포계화중조병독적확증；확증병독적리자교환순화； TCID50측정병독입자화효개적수목；적형광적형광현미경중조선병독표체。결과 PCR감정，매절분석화측서증실성공구건인VEGF기인적휴대록색형광단백표기（적hVEGF165）중조질립적pDC316-적hVEGF165-MCMV-EGFP화동원중조선병독Ad5적-적hVEGF165-EGFP적성공。확증화순화후，선병독과립적수량측량5.4×1011 VP/mL，약2.0，위1.8×1010CCID50/mL적적도OD260/OD280치。결론성공구건휴대hVEGF165기인중조선병독재체Ad5-hVEGF165-EGFP병획득고적도병독과립，위hVEGF165기인공능연구이급세포이식、기인치료제공유효적공구。