CAJ | 학술논문

目的：探讨Klotho基因对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用的机制。方法取2月龄Wistar大鼠，腹腔注射 STZ诱导产生糖尿病，2 w后检测大鼠尿微量白蛋白增高证明糖尿病肾病（ DN）大鼠模型制备成功，另取18只正常大鼠腹腔注射等量柠檬酸缓冲液作为对照组（ Con 组）。将54只DN模型大鼠随机分成DN组、Ad组和Klotho组，Klotho组每隔2 w大鼠尾静脉注射含Klotho基因病毒3×108 PFU，Ad组注射等量不含Klotho基因的病毒，Con组和DN组注射等体积生理盐水。四组大鼠均至第4、8、16周处死，取肾组织。病理观察肾脏形态学变化，免疫组化观察Klotho蛋白和PAI-1的表达与分布；RT-PCR检测基因 Klotho、TGF-β1、p15、p21、p27、PAI-1 mRNA 在肾组织的表达，Quantity one 图像分析软件分析其表达量差异。结果免疫组化检测结果显示，与Con组对比，4、8、16w时，DN组和Ad组大鼠肾小球、肾小管及肾间质内Klotho蛋白表达量减少，而 Klotho组大鼠肾脏Klotho蛋白表达量变化不明显，与Con组接近；与Con 组相比，DN组和Ad组 PAI-1蛋白表达量增加，Klotho组的PAI-1蛋白表达量变化不明显，接近Con组。 RT-PCR结果显示，Klotho、TGF-β1、p15、p21、p27、PAI-1基因PCR产物与预期扩增产物大小一致，与Con组对比，在4、8、16 w时DN组和Ad组的Klotho mRNA表达量明显减少（P＝0．010～0．001），Klotho 组 Klotho mRNA 表达量变化不明显，但高于 DN组和 Ad组（P＝0．002～0．001）。DN组和Ad组TGF-β1、 p15、p21、p27、PAI-1 mRNA 表达量明显高于 Con组（P＝0．041～0．002），Klotho组变化不明显，接近 Con组，但低于DN组和Ad组（P＝0．048～0．002）。结论 Klotho基因通过下调TGF-β1、PAI-1、p15、p21、p27基因的表达而实现对糖尿病大鼠肾脏的保护作用。
목적：탐토Klotho기인대당뇨병신병대서신장보호작용적궤제。방법취2월령Wistar대서，복강주사 STZ유도산생당뇨병，2 w후검측대서뇨미량백단백증고증명당뇨병신병（ DN）대서모형제비성공，령취18지정상대서복강주사등량저몽산완충액작위대조조（ Con 조）。장54지DN모형대서수궤분성DN조、Ad조화Klotho조，Klotho조매격2 w대서미정맥주사함Klotho기인병독3×108 PFU，Ad조주사등량불함Klotho기인적병독，Con조화DN조주사등체적생리염수。사조대서균지제4、8、16주처사，취신조직。병리관찰신장형태학변화，면역조화관찰Klotho단백화PAI-1적표체여분포；RT-PCR검측기인 Klotho、TGF-β1、p15、p21、p27、PAI-1 mRNA 재신조직적표체，Quantity one 도상분석연건분석기표체량차이。결과면역조화검측결과현시，여Con조대비，4、8、16w시，DN조화Ad조대서신소구、신소관급신간질내Klotho단백표체량감소，이 Klotho조대서신장Klotho단백표체량변화불명현，여Con조접근；여Con 조상비，DN조화Ad조 PAI-1단백표체량증가，Klotho조적PAI-1단백표체량변화불명현，접근Con조。 RT-PCR결과현시，Klotho、TGF-β1、p15、p21、p27、PAI-1기인PCR산물여예기확증산물대소일치，여Con조대비，재4、8、16 w시DN조화Ad조적Klotho mRNA표체량명현감소（P＝0．010～0．001），Klotho 조 Klotho mRNA 표체량변화불명현，단고우 DN조화 Ad조（P＝0．002～0．001）。DN조화Ad조TGF-β1、 p15、p21、p27、PAI-1 mRNA 표체량명현고우 Con조（P＝0．041～0．002），Klotho조변화불명현，접근 Con조，단저우DN조화Ad조（P＝0．048～0．002）。결론 Klotho기인통과하조TGF-β1、PAI-1、p15、p21、p27기인적표체이실현대당뇨병대서신장적보호작용。