医学研究杂志
醫學研究雜誌
의학연구잡지
JOURNAL OF MEDICAL RESEARCH
2014年
2期
117-120
,共4页
夏利龙%朱成楚%陈保富%张波%陈宇%胡炳川%张健
夏利龍%硃成楚%陳保富%張波%陳宇%鬍炳川%張健
하리룡%주성초%진보부%장파%진우%호병천%장건
血管内皮生长因子%腺相关病毒%心肌缺血%骨髓间充质干细胞
血管內皮生長因子%腺相關病毒%心肌缺血%骨髓間充質榦細胞
혈관내피생장인자%선상관병독%심기결혈%골수간충질간세포
VEGF%Adeno-associated virus%Myocardial ischemia%MSCs
目的 构建携带人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)的重组腺相关病毒载体,在体外转染猪骨髓间充质干细胞并观察其表达.方法 细胞AAV包装质粒pAAV-IRES-ZsGreen及含hVEGF的质粒经EcoR Ⅰ +BamH Ⅰ双酶切、连接,构建pAAV-hVEGF165-IRES-ZsGreen载体,采用磷酸钙法转染293AAV细胞系,获得rAAV2-hVEGF165及对照重组腺相关病毒,real-time PCR法测定病毒效价.Western blot检测重组rAAV2-hVEGF165在猪骨髓间充质干细胞的表达,MTS法检测VEGF蛋白活性.结果 成功构建rAAV2-hVEGF165重组腺相关病毒载体,rAAV2-hVEGF165经双酶切和测序鉴定正确,real-time PCR法测定病毒效价为5×1012vg/ml.转染rAAV2-hVEGF165的猪骨髓干细胞能够有效表达VEGF蛋白,并能促进血管内皮细胞的增殖.结论 成功构建rAAV2-hVEGF165重组腺相关病毒载体,并能在猪骨髓间充质干细胞中有效转染和表达,为进一步探索rAAV2-hVEGF165对治疗缺血性心肌疾病的研究提供实验基础.
目的 構建攜帶人血管內皮細胞生長因子(hVEGF)的重組腺相關病毒載體,在體外轉染豬骨髓間充質榦細胞併觀察其錶達.方法 細胞AAV包裝質粒pAAV-IRES-ZsGreen及含hVEGF的質粒經EcoR Ⅰ +BamH Ⅰ雙酶切、連接,構建pAAV-hVEGF165-IRES-ZsGreen載體,採用燐痠鈣法轉染293AAV細胞繫,穫得rAAV2-hVEGF165及對照重組腺相關病毒,real-time PCR法測定病毒效價.Western blot檢測重組rAAV2-hVEGF165在豬骨髓間充質榦細胞的錶達,MTS法檢測VEGF蛋白活性.結果 成功構建rAAV2-hVEGF165重組腺相關病毒載體,rAAV2-hVEGF165經雙酶切和測序鑒定正確,real-time PCR法測定病毒效價為5×1012vg/ml.轉染rAAV2-hVEGF165的豬骨髓榦細胞能夠有效錶達VEGF蛋白,併能促進血管內皮細胞的增殖.結論 成功構建rAAV2-hVEGF165重組腺相關病毒載體,併能在豬骨髓間充質榦細胞中有效轉染和錶達,為進一步探索rAAV2-hVEGF165對治療缺血性心肌疾病的研究提供實驗基礎.
목적 구건휴대인혈관내피세포생장인자(hVEGF)적중조선상관병독재체,재체외전염저골수간충질간세포병관찰기표체.방법 세포AAV포장질립pAAV-IRES-ZsGreen급함hVEGF적질립경EcoR Ⅰ +BamH Ⅰ쌍매절、련접,구건pAAV-hVEGF165-IRES-ZsGreen재체,채용린산개법전염293AAV세포계,획득rAAV2-hVEGF165급대조중조선상관병독,real-time PCR법측정병독효개.Western blot검측중조rAAV2-hVEGF165재저골수간충질간세포적표체,MTS법검측VEGF단백활성.결과 성공구건rAAV2-hVEGF165중조선상관병독재체,rAAV2-hVEGF165경쌍매절화측서감정정학,real-time PCR법측정병독효개위5×1012vg/ml.전염rAAV2-hVEGF165적저골수간세포능구유효표체VEGF단백,병능촉진혈관내피세포적증식.결론 성공구건rAAV2-hVEGF165중조선상관병독재체,병능재저골수간충질간세포중유효전염화표체,위진일보탐색rAAV2-hVEGF165대치료결혈성심기질병적연구제공실험기출.
