烟草科技
煙草科技
연초과기
TOBACCO SCIENCE & TECHNOLOGY
2014年
2期
81-85
,共5页
张俊祺%杨军%宋纪真%罗朝鹏%王燃%李锋%周小龙
張俊祺%楊軍%宋紀真%囉朝鵬%王燃%李鋒%週小龍
장준기%양군%송기진%라조붕%왕연%리봉%주소룡
烟草%病毒检测%一步法多重RT-PCR
煙草%病毒檢測%一步法多重RT-PCR
연초%병독검측%일보법다중RT-PCR
Tobacco%Virus detection%One-step RT-PCR
一步法多重RT-PCR将反转录(Reverse transcription,RT)和聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)整合为一个步骤,能够在同一反应体系中同时扩增出多个目的片段.为使用一步法多重RT-PCR技术同时检测黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY),根据3种病毒基因组序列相对保守区域设计了3对特异性引物,并对RT-PCR的反应体系和反应条件进行了优化.优化结果显示,最终的多重RT-PCR反应特异性较高,且3个片段的扩增效率基本一致.田间样品的检测结果表明,一步法多重RT-PCR方法能够准确而快速地同时检测出3种病毒,优于酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA).
一步法多重RT-PCR將反轉錄(Reverse transcription,RT)和聚閤酶鏈式反應(Polymerase chain reaction,PCR)整閤為一箇步驟,能夠在同一反應體繫中同時擴增齣多箇目的片段.為使用一步法多重RT-PCR技術同時檢測黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)和馬鈴藷Y病毒(Potato virus Y,PVY),根據3種病毒基因組序列相對保守區域設計瞭3對特異性引物,併對RT-PCR的反應體繫和反應條件進行瞭優化.優化結果顯示,最終的多重RT-PCR反應特異性較高,且3箇片段的擴增效率基本一緻.田間樣品的檢測結果錶明,一步法多重RT-PCR方法能夠準確而快速地同時檢測齣3種病毒,優于酶聯免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA).
일보법다중RT-PCR장반전록(Reverse transcription,RT)화취합매련식반응(Polymerase chain reaction,PCR)정합위일개보취,능구재동일반응체계중동시확증출다개목적편단.위사용일보법다중RT-PCR기술동시검측황과화협병독(Cucumber mosaic virus,CMV)、연초화협병독(Tobacco mosaic virus, TMV)화마령서Y병독(Potato virus Y,PVY),근거3충병독기인조서렬상대보수구역설계료3대특이성인물,병대RT-PCR적반응체계화반응조건진행료우화.우화결과현시,최종적다중RT-PCR반응특이성교고,차3개편단적확증효솔기본일치.전간양품적검측결과표명,일보법다중RT-PCR방법능구준학이쾌속지동시검측출3충병독,우우매련면역흡부법(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA).
