工业微生物
工業微生物
공업미생물
INDUSTRIAL MICROBIOLOGY
2014年
1期
34-39
,共6页
王志臻%仝艳军%杨海麟%王武
王誌臻%仝豔軍%楊海麟%王武
왕지진%동염군%양해린%왕무
3α-羟类固醇脱氢酶%基因全合成%密码子优化%重组DNA表达%酶学性质
3α-羥類固醇脫氫酶%基因全閤成%密碼子優化%重組DNA錶達%酶學性質
3α-간류고순탈경매%기인전합성%밀마자우화%중조DNA표체%매학성질
以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78提高到0.87,GC含量由原来的63.17降低到56.46,大幅度减少了GC簇及寡聚A和T局域的存在,提高 3α-hsd的可表达性.全合成基因定向克隆到pET28a载体中,并转化至大肠杆菌B12l(DE3)中表达.采用乳糖诱导后,SDS-PAGE检测在约27 kD处有一高效表达的蛋白条带.采用Ni螯合柱分离纯化3α-HSD,获得了较高纯度及较高的产率.酶学性质初步分析表明,全基因合成表达的3α-HSD的性质与原始的3α-HSD基本相同.
以NCBI報道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羥類固醇脫氫酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)為模闆,通過改變堿基序列但不影響酶的氨基痠序列,將該基因相對于大腸桿菌的密碼子適用指數由0.78提高到0.87,GC含量由原來的63.17降低到56.46,大幅度減少瞭GC簇及寡聚A和T跼域的存在,提高 3α-hsd的可錶達性.全閤成基因定嚮剋隆到pET28a載體中,併轉化至大腸桿菌B12l(DE3)中錶達.採用乳糖誘導後,SDS-PAGE檢測在約27 kD處有一高效錶達的蛋白條帶.採用Ni螯閤柱分離純化3α-HSD,穫得瞭較高純度及較高的產率.酶學性質初步分析錶明,全基因閤成錶達的3α-HSD的性質與原始的3α-HSD基本相同.
이NCBI보도적Comamonas testosteroni ATCC11996중3α-간류고순탈경매기인(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)위모판,통과개변감기서렬단불영향매적안기산서렬,장해기인상대우대장간균적밀마자괄용지수유0.78제고도0.87,GC함량유원래적63.17강저도56.46,대폭도감소료GC족급과취A화T국역적존재,제고 3α-hsd적가표체성.전합성기인정향극륭도pET28a재체중,병전화지대장간균B12l(DE3)중표체.채용유당유도후,SDS-PAGE검측재약27 kD처유일고효표체적단백조대.채용Ni오합주분리순화3α-HSD,획득료교고순도급교고적산솔.매학성질초보분석표명,전기인합성표체적3α-HSD적성질여원시적3α-HSD기본상동.
