CAJ | 학술논문

目的:建立Notch信号通路激活的人牙髓细胞模型,探讨激活Notch信号通路对人牙髓细胞老化的影响.方法:体外培养人牙髓细胞,从第4代开始实验,将牙髓细胞分为激活组和阴性对照组.激活组采用10 mg/L的Jagged1蛋白包被培养皿的方法激活Notch信号通路,阴性对照组的培养皿不做处理.以实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测第4代、第8代、第10代Notch信号通路下游基因Hes1的表达水平.分三个水平观察Notch信号通路激活后人牙髓细胞的变化:(1)细胞水平,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,用MTT法检测细胞活力改变;(2)代谢酶水平,用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色及活性测定试剂盒检测ALP的表达和活性,用衰老相关β-半乳糖苷酶染色方法检测阳性细胞百分率;(3)基因水平,用RT-qPCR检测老化相关基因p53和p16的表达.t检验比较激活组和阴性对照组各指标的差异.结果:采用Jagged1蛋白包被培养皿后,Notch信号通路下游基因Hes1表达增高,表明建立了Notch信号通路激活的人牙髓细胞模型.激活组牙髓细胞与阴性对照组牙髓细胞相比,较晚出现形态显现衰老的细胞,第8代、第10代细胞活力升高,ALP表达量升高;第10代ALP活性升高,β-半乳糖苷酶表达下降;各代p16基因表达水平均降低,第8代、第10代p53基因表达水平降低.结论:Jagged1蛋白可有效激活Notch信号通路,激活Notch信号通路后,人牙髓细胞在细胞水平、代谢酶水平、基因水平均表现出老化延迟的趋势.
목적:건립Notch신호통로격활적인아수세포모형,탐토격활Notch신호통로대인아수세포노화적영향.방법:체외배양인아수세포,종제4대개시실험,장아수세포분위격활조화음성대조조.격활조채용10 mg/L적Jagged1단백포피배양명적방법격활Notch신호통로,음성대조조적배양명불주처리.이실시정량PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)검측제4대、제8대、제10대Notch신호통로하유기인Hes1적표체수평.분삼개수평관찰Notch신호통로격활후인아수세포적변화:(1)세포수평,용도치현미경관찰세포형태적변화,용MTT법검측세포활력개변;(2)대사매수평,용감성린산매(alkaline phosphatase,ALP)염색급활성측정시제합검측ALP적표체화활성,용쇠로상관β-반유당감매염색방법검측양성세포백분솔;(3)기인수평,용RT-qPCR검측노화상관기인p53화p16적표체.t검험비교격활조화음성대조조각지표적차이.결과:채용Jagged1단백포피배양명후,Notch신호통로하유기인Hes1표체증고,표명건립료Notch신호통로격활적인아수세포모형.격활조아수세포여음성대조조아수세포상비,교만출현형태현현쇠로적세포,제8대、제10대세포활력승고,ALP표체량승고;제10대ALP활성승고,β-반유당감매표체하강;각대p16기인표체수평균강저,제8대、제10대p53기인표체수평강저.결론:Jagged1단백가유효격활Notch신호통로,격활Notch신호통로후,인아수세포재세포수평、대사매수평、기인수평균표현출노화연지적추세.