比格犬ERβ1293基因真核载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达和定位
비격견ERβ1293기인진핵재체적구건급기재HEK293T세포중적표체화정위
Expression and localization of eukaryotic expression vectors of Beagles ERβ1293 gene in the HEK293T cells
  • 万方数据
    中国比较医学杂志 중국비교의학잡지
    CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE
    2014年 2期 7-10,15,后插1 ,共6页

    甘艺%钟睿%任秀梅%赵彦斌%胡仲明%刘冰%陈旖%孙兆增%曾林%杨焕民

    감예%종예%임수매%조언빈%호중명%류빙%진의%손조증%증림%양환민

    比格犬%ERβ1293%蛋白定位%第4外显子缺失 比格犬%ERβ1293%蛋白定位%第4外顯子缺失
    비격견%ERβ1293%단백정위%제4외현자결실
    目的 观察比格犬Myc 标签ERβ1293重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位.方法 以pEGFP-N1-ERβ1293重组真核表达载体为模板,PCR保真酶扩增得到ERβ1293基因编码区全长.Myc标签ERβ1293重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞,运用蛋白质印迹技术(Western blotting)和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence,IF)鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ1293在HEK293T细胞中的表达和定位情况.结果 成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ1293重组真核表达载体,转染至HEK293T细胞中.Western blotting检测有蛋白条带表达,共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞,荧光定位于细胞质.结论 前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ1293编码区序列,缺失第四外显子,导致其与配体结合能力减弱或消失,因此目的 基因编码蛋白定位在细胞中发生变化.
    목적 관찰비격견Myc 표첨ERβ1293중조진핵표체재체재HEK293T세포중적표체급정위.방법 이pEGFP-N1-ERβ1293중조진핵표체재체위모판,PCR보진매확증득도ERβ1293기인편마구전장.Myc표첨ERβ1293중조진핵재체순시전염HEK293T세포,운용단백질인적기술(Western blotting)화간접면역형광기술(indirect immunofluorescence,IF)감정pcDNA3.1-Myc-ERβ1293재HEK293T세포중적표체화정위정황.결과 성공구건pcDNA3.1-Myc-ERβ1293중조진핵표체재체,전염지HEK293T세포중.Western blotting검측유단백조대표체,공취초현미경하관찰IF처리후적전염세포,형광정위우세포질.결론 전기실험득도비격견ERβ전절이구체ERβ1293편마구서렬,결실제사외현자,도치기여배체결합능력감약혹소실,인차목적 기인편마단백정위재세포중발생변화.
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