兰州大学学报（医学版）
蘭州大學學報（醫學版）
란주대학학보（의학판）
JOURNAL OF LANZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2013年
3期
4-9
,共6页
四环素诱导调控%腺病毒载体%RNA干扰%强力霉素
四環素誘導調控%腺病毒載體%RNA榦擾%彊力黴素
사배소유도조공%선병독재체%RNA간우%강력매소
tetracycline-inducible regulation%adenovirus vector%RNA interference%doxycycline
目的 构建四环素诱导调控基因表达的腺病毒载体系统,评估该载体系统的高效性.方法 利用PCR、限制性内切酶酶切、连接等分子生物学手段构建四环素诱导调控体系中调节因子序列、应答元件序列的穿梭载体.通过同源重组的方法将载体上的四环素调控因子以及应答元件序列整合于腺病毒基因组.利用RT-PCR检测病毒载体上四环素调节因子(rtTA和tTA)在Hela细胞中的转录水平;荧光素酶活性测定分析腺病毒载体系统的效率.在不同浓度强力霉素的诱导下,检测荧光素酶报告基因活性变化,分析可诱导调控腺病毒系统的有效性和敏感性.结果 调控性腺病毒Ad-rtTATet-on与Ad-tTATet-off分别感染Hela细胞,逆转录PCR检测鉴定腺病毒载体Ad-rtTATet-on与Ad-tTATet-off的表达克隆用于调控应答性腺病毒Ad-TREmod/minCMV△-LUC、Ad-TREmod/U6-shLUC.在强力霉素的诱导下调控性腺病毒Ad-rtTATet-on与Ad-tTATet-off能够开启或关闭应答性腺病毒Ad-TREmod/minCMV△-LUC、Ad-TREmod/U6-shLUC的表达,从而达到调控荧光素酶的表达或RNA干扰荧光素酶基因的目的.结论 构建可诱导调控的腺病毒载体系统,该系统能够在强力霉素的调控下开/关目的基因、特异性干扰目的基因shRNA片段的表达.
目的 構建四環素誘導調控基因錶達的腺病毒載體繫統,評估該載體繫統的高效性.方法 利用PCR、限製性內切酶酶切、連接等分子生物學手段構建四環素誘導調控體繫中調節因子序列、應答元件序列的穿梭載體.通過同源重組的方法將載體上的四環素調控因子以及應答元件序列整閤于腺病毒基因組.利用RT-PCR檢測病毒載體上四環素調節因子(rtTA和tTA)在Hela細胞中的轉錄水平;熒光素酶活性測定分析腺病毒載體繫統的效率.在不同濃度彊力黴素的誘導下,檢測熒光素酶報告基因活性變化,分析可誘導調控腺病毒繫統的有效性和敏感性.結果 調控性腺病毒Ad-rtTATet-on與Ad-tTATet-off分彆感染Hela細胞,逆轉錄PCR檢測鑒定腺病毒載體Ad-rtTATet-on與Ad-tTATet-off的錶達剋隆用于調控應答性腺病毒Ad-TREmod/minCMV△-LUC、Ad-TREmod/U6-shLUC.在彊力黴素的誘導下調控性腺病毒Ad-rtTATet-on與Ad-tTATet-off能夠開啟或關閉應答性腺病毒Ad-TREmod/minCMV△-LUC、Ad-TREmod/U6-shLUC的錶達,從而達到調控熒光素酶的錶達或RNA榦擾熒光素酶基因的目的.結論 構建可誘導調控的腺病毒載體繫統,該繫統能夠在彊力黴素的調控下開/關目的基因、特異性榦擾目的基因shRNA片段的錶達.
목적 구건사배소유도조공기인표체적선병독재체계통,평고해재체계통적고효성.방법 이용PCR、한제성내절매매절、련접등분자생물학수단구건사배소유도조공체계중조절인자서렬、응답원건서렬적천사재체.통과동원중조적방법장재체상적사배소조공인자이급응답원건서렬정합우선병독기인조.이용RT-PCR검측병독재체상사배소조절인자(rtTA화tTA)재Hela세포중적전록수평;형광소매활성측정분석선병독재체계통적효솔.재불동농도강력매소적유도하,검측형광소매보고기인활성변화,분석가유도조공선병독계통적유효성화민감성.결과 조공성선병독Ad-rtTATet-on여Ad-tTATet-off분별감염Hela세포,역전록PCR검측감정선병독재체Ad-rtTATet-on여Ad-tTATet-off적표체극륭용우조공응답성선병독Ad-TREmod/minCMV△-LUC、Ad-TREmod/U6-shLUC.재강력매소적유도하조공성선병독Ad-rtTATet-on여Ad-tTATet-off능구개계혹관폐응답성선병독Ad-TREmod/minCMV△-LUC、Ad-TREmod/U6-shLUC적표체,종이체도조공형광소매적표체혹RNA간우형광소매기인적목적.결론 구건가유도조공적선병독재체계통,해계통능구재강력매소적조공하개/관목적기인、특이성간우목적기인shRNA편단적표체.
