中国奶牛
中國奶牛
중국내우
CHINA DAIRY CATTLE
2013年
17期
3-8
,共6页
纪素坤%邓明亮%费文涛%胡长敏%陈颖钰%郭爱珍%陈焕春
紀素坤%鄧明亮%費文濤%鬍長敏%陳穎鈺%郭愛珍%陳煥春
기소곤%산명량%비문도%호장민%진영옥%곽애진%진환춘
牛传染性鼻气管炎%牛疱疹病毒Ⅰ型%GM-CSF%重组病毒%基因工程疫苗
牛傳染性鼻氣管炎%牛皰疹病毒Ⅰ型%GM-CSF%重組病毒%基因工程疫苗
우전염성비기관염%우포진병독Ⅰ형%GM-CSF%중조병독%기인공정역묘
通过引入免疫增强因子GM-CSF,提高重组病毒的免疫原性.将牛GM-CSF克隆到pcDNA3.1载体中,构建GM-CSF基因表达盒;将tk基因上游同源臂、GM-CSF基因表达盒、tk基因下游同源臂克隆到pcDNA3.1载体中,得到转移载体pTK-GM-CSF.将亲本病毒BHV-1 gG-/TK-/EGFP+基因组与转移载体pTK-GM-CSF采用磷酸钙法共转染MDBK细胞,得到重组病毒BHV-1 gG-/TK-/GM-CSF+.并对重组病毒的生物学特性和对日本大耳白兔的免疫原性进行了评价.利用PCR和RT-PCR证实GM-CSF基因表达盒已正确插入重组病毒的tk基因位置,并具有转录活性.亲本株和重组株的空斑形态、空斑直径大小无明显差异;两者病毒滴度无明显变化,生长曲线相似;体外遗传稳定性良好.兔体试验表明,在免疫早期重组毒株能产生较亲本株更高水平的IFN-β(P＜0.05).但中和抗体水平、攻毒后的临床症状及病毒排毒时间等各项指标检测表明,亲本株和重组毒株之间无明显差异.在免疫早期重组株刺激机体产生的IFN-β高于亲本株,具有一定的应用前景.
通過引入免疫增彊因子GM-CSF,提高重組病毒的免疫原性.將牛GM-CSF剋隆到pcDNA3.1載體中,構建GM-CSF基因錶達盒;將tk基因上遊同源臂、GM-CSF基因錶達盒、tk基因下遊同源臂剋隆到pcDNA3.1載體中,得到轉移載體pTK-GM-CSF.將親本病毒BHV-1 gG-/TK-/EGFP+基因組與轉移載體pTK-GM-CSF採用燐痠鈣法共轉染MDBK細胞,得到重組病毒BHV-1 gG-/TK-/GM-CSF+.併對重組病毒的生物學特性和對日本大耳白兔的免疫原性進行瞭評價.利用PCR和RT-PCR證實GM-CSF基因錶達盒已正確插入重組病毒的tk基因位置,併具有轉錄活性.親本株和重組株的空斑形態、空斑直徑大小無明顯差異;兩者病毒滴度無明顯變化,生長麯線相似;體外遺傳穩定性良好.兔體試驗錶明,在免疫早期重組毒株能產生較親本株更高水平的IFN-β(P＜0.05).但中和抗體水平、攻毒後的臨床癥狀及病毒排毒時間等各項指標檢測錶明,親本株和重組毒株之間無明顯差異.在免疫早期重組株刺激機體產生的IFN-β高于親本株,具有一定的應用前景.
통과인입면역증강인자GM-CSF,제고중조병독적면역원성.장우GM-CSF극륭도pcDNA3.1재체중,구건GM-CSF기인표체합;장tk기인상유동원비、GM-CSF기인표체합、tk기인하유동원비극륭도pcDNA3.1재체중,득도전이재체pTK-GM-CSF.장친본병독BHV-1 gG-/TK-/EGFP+기인조여전이재체pTK-GM-CSF채용린산개법공전염MDBK세포,득도중조병독BHV-1 gG-/TK-/GM-CSF+.병대중조병독적생물학특성화대일본대이백토적면역원성진행료평개.이용PCR화RT-PCR증실GM-CSF기인표체합이정학삽입중조병독적tk기인위치,병구유전록활성.친본주화중조주적공반형태、공반직경대소무명현차이;량자병독적도무명현변화,생장곡선상사;체외유전은정성량호.토체시험표명,재면역조기중조독주능산생교친본주경고수평적IFN-β(P＜0.05).단중화항체수평、공독후적림상증상급병독배독시간등각항지표검측표명,친본주화중조독주지간무명현차이.재면역조기중조주자격궤체산생적IFN-β고우친본주,구유일정적응용전경.
