中华乳腺病杂志（电子版）
中華乳腺病雜誌（電子版）
중화유선병잡지（전자판）
CHINESE JOURNAL OF BREAST DISEASE(ELECTRONIC VERSION)
2013年
4期
1-6
,共6页
齐晓伟%杨新华%张毅%范林军%张帆%陈莉%唐振宁%张彦%杨晓宁
齊曉偉%楊新華%張毅%範林軍%張帆%陳莉%唐振寧%張彥%楊曉寧
제효위%양신화%장의%범림군%장범%진리%당진저%장언%양효저
Wilms瘤基因1%RNA干扰%RNA激活%乳腺肿瘤
Wilms瘤基因1%RNA榦擾%RNA激活%乳腺腫瘤
Wilms류기인1%RNA간우%RNA격활%유선종류
Wilms' tumor gene 1%RNA interference%RNA activating%Breast neoplasms
目的 应用RNA干扰(RNAi)和RNA激活(RNAa)技术,分别构建小干扰RNA(siRNA)和双链RNA(dsRNA),建立Wilms瘤基因1(WT1)低表达和过表达的乳腺癌细胞模型.方法 以国外学者提供的3条序列(siRNA-516 、siRNA-803、siRNA-1029)构建WT1 siRNA干扰表达WT1,以研究已证实可上调WT1表达的序列(dsRNA-319)构建dsRNA过表达WT1,通过脂质体(LipofectamineTM2000)分别将siRNA和dsRNA转入MDA-MB-321和MCF-7细胞.WT1有效siRNA筛选实验分为6组:WT1siRNA-516、WT1 siRNA-803、WT1 siRNA-1029、阴性对照、脂质体组和空白细胞组；观察转染效率的时间点为转染后24、48、72 h.WT1 dsRNA的筛选实验分为3组:WT1 dsRNA-319、阴性对照组和空白细胞组；观察转染效率的时间点为转染后48、72、96 h.通过实时定量PCR(qRT-PCR)和Westem Blotting筛选作用效果最明显的siRNA和dsRNA.使用单因素方差分析进行统计学分析.结果 成功构建WT1siRNA-516、WT1 siRNA-803和WT1 siRNA-1029共3个siRNA,并转染到MDA-MB-231细胞中,转染效率达90％以上.上述3个WT1 siRNA均能够抑制WT1 mRNA和蛋白的表达,以转染后48 h WT1 siRNA-1029的效果最为显著[WT1 siRNA-1029组WT1 mRNA表达水平与空白细胞组相比显著降低(0.49±0.02比1.00±0.08,P=0.00),其蛋白表达水平也明显降低].成功将WT1 dsRNA-319转染到MCF-7细胞中,转染效率达90％以上.50 μmol/L的WT1 dsRNA-319转染后96 h,MCF-7细胞的WT1过表达最为显著[WT1 dsRNA-319组的WT1 mRNA表达水平与空白细胞组相比显著升高(319.06±14.84比1.00±0.07,P=0.00),其蛋白表达水平也明显升高].结论 成功建立低表达WT1的MDA-MB-231细胞和过表达WT1的MCF-7细胞模型,为后续进一步研究WT1在乳腺癌中的生物学行为奠定了基础.
目的 應用RNA榦擾(RNAi)和RNA激活(RNAa)技術,分彆構建小榦擾RNA(siRNA)和雙鏈RNA(dsRNA),建立Wilms瘤基因1(WT1)低錶達和過錶達的乳腺癌細胞模型.方法 以國外學者提供的3條序列(siRNA-516 、siRNA-803、siRNA-1029)構建WT1 siRNA榦擾錶達WT1,以研究已證實可上調WT1錶達的序列(dsRNA-319)構建dsRNA過錶達WT1,通過脂質體(LipofectamineTM2000)分彆將siRNA和dsRNA轉入MDA-MB-321和MCF-7細胞.WT1有效siRNA篩選實驗分為6組:WT1siRNA-516、WT1 siRNA-803、WT1 siRNA-1029、陰性對照、脂質體組和空白細胞組；觀察轉染效率的時間點為轉染後24、48、72 h.WT1 dsRNA的篩選實驗分為3組:WT1 dsRNA-319、陰性對照組和空白細胞組；觀察轉染效率的時間點為轉染後48、72、96 h.通過實時定量PCR(qRT-PCR)和Westem Blotting篩選作用效果最明顯的siRNA和dsRNA.使用單因素方差分析進行統計學分析.結果 成功構建WT1siRNA-516、WT1 siRNA-803和WT1 siRNA-1029共3箇siRNA,併轉染到MDA-MB-231細胞中,轉染效率達90％以上.上述3箇WT1 siRNA均能夠抑製WT1 mRNA和蛋白的錶達,以轉染後48 h WT1 siRNA-1029的效果最為顯著[WT1 siRNA-1029組WT1 mRNA錶達水平與空白細胞組相比顯著降低(0.49±0.02比1.00±0.08,P=0.00),其蛋白錶達水平也明顯降低].成功將WT1 dsRNA-319轉染到MCF-7細胞中,轉染效率達90％以上.50 μmol/L的WT1 dsRNA-319轉染後96 h,MCF-7細胞的WT1過錶達最為顯著[WT1 dsRNA-319組的WT1 mRNA錶達水平與空白細胞組相比顯著升高(319.06±14.84比1.00±0.07,P=0.00),其蛋白錶達水平也明顯升高].結論 成功建立低錶達WT1的MDA-MB-231細胞和過錶達WT1的MCF-7細胞模型,為後續進一步研究WT1在乳腺癌中的生物學行為奠定瞭基礎.
목적 응용RNA간우(RNAi)화RNA격활(RNAa)기술,분별구건소간우RNA(siRNA)화쌍련RNA(dsRNA),건립Wilms류기인1(WT1)저표체화과표체적유선암세포모형.방법 이국외학자제공적3조서렬(siRNA-516 、siRNA-803、siRNA-1029)구건WT1 siRNA간우표체WT1,이연구이증실가상조WT1표체적서렬(dsRNA-319)구건dsRNA과표체WT1,통과지질체(LipofectamineTM2000)분별장siRNA화dsRNA전입MDA-MB-321화MCF-7세포.WT1유효siRNA사선실험분위6조:WT1siRNA-516、WT1 siRNA-803、WT1 siRNA-1029、음성대조、지질체조화공백세포조；관찰전염효솔적시간점위전염후24、48、72 h.WT1 dsRNA적사선실험분위3조:WT1 dsRNA-319、음성대조조화공백세포조；관찰전염효솔적시간점위전염후48、72、96 h.통과실시정량PCR(qRT-PCR)화Westem Blotting사선작용효과최명현적siRNA화dsRNA.사용단인소방차분석진행통계학분석.결과 성공구건WT1siRNA-516、WT1 siRNA-803화WT1 siRNA-1029공3개siRNA,병전염도MDA-MB-231세포중,전염효솔체90％이상.상술3개WT1 siRNA균능구억제WT1 mRNA화단백적표체,이전염후48 h WT1 siRNA-1029적효과최위현저[WT1 siRNA-1029조WT1 mRNA표체수평여공백세포조상비현저강저(0.49±0.02비1.00±0.08,P=0.00),기단백표체수평야명현강저].성공장WT1 dsRNA-319전염도MCF-7세포중,전염효솔체90％이상.50 μmol/L적WT1 dsRNA-319전염후96 h,MCF-7세포적WT1과표체최위현저[WT1 dsRNA-319조적WT1 mRNA표체수평여공백세포조상비현저승고(319.06±14.84비1.00±0.07,P=0.00),기단백표체수평야명현승고].결론 성공건립저표체WT1적MDA-MB-231세포화과표체WT1적MCF-7세포모형,위후속진일보연구WT1재유선암중적생물학행위전정료기출.
