CAJ | 학술논문

将重组质粒pET30a-bme转化至表达宿主菌E.coli BL21 (DE3),在终浓度0.2mmol/L的IPTG诱导下,实现BME功能性表达,利用亲和层析纯化表达产物,并研究其酶学性质.分离纯化的重组酯酶经SDS-PAGE电泳检测为单一条带,其分子量约为41.5 kDa.该酶最适反应温度和pH分别为70 ℃与7.5,比酶活为200 U/mg.BME能耐受低浓度(1mmol/L)的Na+,Zn2+,Ca2+,Mg2+,Mn2+和EDTA等,但较高浓度(5 mmol/L)的Na+,Zn2+,Ca2+对酶活有一定抑制作用.体积分数在0％-80％范围,BME对甲醇具有良好的耐受性,而体积分数在50％时Triton X-100对其酶活有一定抑制作用.同时发现该酶对4-氯-3-羟基丁酸乙酯具有立体选择性,拆分反应的转化率和底物e.e.值分别为50％和70％.
장중조질립pET30a-bme전화지표체숙주균E.coli BL21 (DE3),재종농도0.2mmol/L적IPTG유도하,실현BME공능성표체,이용친화층석순화표체산물,병연구기매학성질.분리순화적중조지매경SDS-PAGE전영검측위단일조대,기분자량약위41.5 kDa.해매최괄반응온도화pH분별위70 ℃여7.5,비매활위200 U/mg.BME능내수저농도(1mmol/L)적Na+,Zn2+,Ca2+,Mg2+,Mn2+화EDTA등,단교고농도(5 mmol/L)적Na+,Zn2+,Ca2+대매활유일정억제작용.체적분수재0％-80％범위,BME대갑순구유량호적내수성,이체적분수재50％시Triton X-100대기매활유일정억제작용.동시발현해매대4-록-3-간기정산을지구유입체선택성,탁분반응적전화솔화저물e.e.치분별위50％화70％.