实验与检验医学
實驗與檢驗醫學
실험여검험의학
EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINE
2013年
5期
454-455
,共2页
尘螨%提取方法%过敏原%ELISA
塵螨%提取方法%過敏原%ELISA
진만%제취방법%과민원%ELISA
目的 采用改进的Coca'8液提取户尘螨螨体中的蛋白,提高提取液的蛋白浓度和过敏原蛋白的效价.方法 (1)细胞破碎:取样品于研钵内,液氮反复冻融4次,每次间隔10min,在研钵内反复研磨冻融后的样品.(2)蛋白提取:在离心管中加入10mlCoca's液,4℃匀速搅拌4h后置于4℃冰箱过夜.(3)离心:4℃,5000×g离心1h,取上清液备用.(4)测提取蛋白的浓度:Bradford Reagent法测其提取蛋白的浓度.(5)SDS-PAGE电泳:参照Tricine-SDS-PAGE配制10％分离胶和4％浓缩胶,上样10μL.(6)采用酶联免疫吸附实验(ELISA)进行本研究获得的提取液与进口户尘螨过敏原蛋白产品的功能性比较.结果 本研究中户尘螨过敏原蛋白提取液的蛋白浓度为3.0 mg/ml,远高于美国ALLERMED公司产品的0.35mg,/ml;且电泳图显示包含分子量为25kDa、14kDa的户尘螨主要过敏原蛋白Der p 1、Der p 2条带,蛋白浓度也高于美国ALLERMED公司产品相应的条带;功能性实验中也表明本研究中户尘螨过敏原蛋白提取液的免疫效价也显著高于美国ALLERMED公司产品.结论 可以用本研究的方法来大量提取户尘螨过敏原蛋白,提取液可替代进口产品,用作户尘螨过敏原检测试剂的生产原料或用于户尘螨过敏原皮试、点刺及脱敏治疗等,降低这些产品的生产成本,进而降低国内户尘螨过敏的诊疗费用.
目的 採用改進的Coca'8液提取戶塵螨螨體中的蛋白,提高提取液的蛋白濃度和過敏原蛋白的效價.方法 (1)細胞破碎:取樣品于研缽內,液氮反複凍融4次,每次間隔10min,在研缽內反複研磨凍融後的樣品.(2)蛋白提取:在離心管中加入10mlCoca's液,4℃勻速攪拌4h後置于4℃冰箱過夜.(3)離心:4℃,5000×g離心1h,取上清液備用.(4)測提取蛋白的濃度:Bradford Reagent法測其提取蛋白的濃度.(5)SDS-PAGE電泳:參照Tricine-SDS-PAGE配製10％分離膠和4％濃縮膠,上樣10μL.(6)採用酶聯免疫吸附實驗(ELISA)進行本研究穫得的提取液與進口戶塵螨過敏原蛋白產品的功能性比較.結果 本研究中戶塵螨過敏原蛋白提取液的蛋白濃度為3.0 mg/ml,遠高于美國ALLERMED公司產品的0.35mg,/ml;且電泳圖顯示包含分子量為25kDa、14kDa的戶塵螨主要過敏原蛋白Der p 1、Der p 2條帶,蛋白濃度也高于美國ALLERMED公司產品相應的條帶;功能性實驗中也錶明本研究中戶塵螨過敏原蛋白提取液的免疫效價也顯著高于美國ALLERMED公司產品.結論 可以用本研究的方法來大量提取戶塵螨過敏原蛋白,提取液可替代進口產品,用作戶塵螨過敏原檢測試劑的生產原料或用于戶塵螨過敏原皮試、點刺及脫敏治療等,降低這些產品的生產成本,進而降低國內戶塵螨過敏的診療費用.
목적 채용개진적Coca'8액제취호진만만체중적단백,제고제취액적단백농도화과민원단백적효개.방법 (1)세포파쇄:취양품우연발내,액담반복동융4차,매차간격10min,재연발내반복연마동융후적양품.(2)단백제취:재리심관중가입10mlCoca's액,4℃균속교반4h후치우4℃빙상과야.(3)리심:4℃,5000×g리심1h,취상청액비용.(4)측제취단백적농도:Bradford Reagent법측기제취단백적농도.(5)SDS-PAGE전영:삼조Tricine-SDS-PAGE배제10％분리효화4％농축효,상양10μL.(6)채용매련면역흡부실험(ELISA)진행본연구획득적제취액여진구호진만과민원단백산품적공능성비교.결과 본연구중호진만과민원단백제취액적단백농도위3.0 mg/ml,원고우미국ALLERMED공사산품적0.35mg,/ml;차전영도현시포함분자량위25kDa、14kDa적호진만주요과민원단백Der p 1、Der p 2조대,단백농도야고우미국ALLERMED공사산품상응적조대;공능성실험중야표명본연구중호진만과민원단백제취액적면역효개야현저고우미국ALLERMED공사산품.결론 가이용본연구적방법래대량제취호진만과민원단백,제취액가체대진구산품,용작호진만과민원검측시제적생산원료혹용우호진만과민원피시、점자급탈민치료등,강저저사산품적생산성본,진이강저국내호진만과민적진료비용.
