江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2014年
1期
22-25
,共4页
李旭艳%邵淑丽%张伟伟%恽东泽%付博%张珍珠
李旭豔%邵淑麗%張偉偉%惲東澤%付博%張珍珠
리욱염%소숙려%장위위%운동택%부박%장진주
shRNA%pSilencer 2.1 -U6 neo质粒%多药耐药性%HT9细胞%姜黄素
shRNA%pSilencer 2.1 -U6 neo質粒%多藥耐藥性%HT9細胞%薑黃素
shRNA%pSilencer 2.1 -U6 neo질립%다약내약성%HT9세포%강황소
通过pSilencer 2．1质粒介导的RNAi技术沉默急性早幼粒白血病耐药HT9细胞的耐药基因mdr1表达，可提高耐药细胞对姜黄素的敏感性。通过设计合成靶向mdr1基因的shRNA干扰片段，定向克隆到pSilencer 2．1-U6 neo质粒中，成功构建沉默mdr1基因特异表达的shRNA表达载体，电转染HT9细胞后筛选阳性克隆扩大培养。采用实时荧光定量PCR、Western blot检测细胞mdr1基因表达情况，流式细胞术检测P-糖蛋白外排泵功能，MTT法和流式细胞技术检测细胞对药物敏感性和细胞周期分布。结果显示，构建的shRNA表达载体pU6/shRNA/mdr1转染HT9细胞后，HT9/pU6/shRNA细胞mdr1 mRNA表达降低了78．84％（P＜0．01），P-糖蛋白的表达量降低了48．27％（P＜0．05），细胞内Rho123相对荧光强度由10．8％±0.58％升高至73．56％±1．37％；转染细胞对姜黄素敏感性明显增强，IC50由（24．10±0．83）μmol/L降至（5．10±0.14）μmol/L；耐药相对逆转率为84．74％±1．86％，与HT9细胞相比，经姜黄素处理的稳定转染细胞HT9/pU6/shRNA细胞周期阻滞在S、G2/M期。说明质粒介导的shRNA表达载体pU6/shRNA/mdr1能够稳定、持久地抑制mdr1基因表达，能有效增强HT9细胞对姜黄素的敏感性。
通過pSilencer 2．1質粒介導的RNAi技術沉默急性早幼粒白血病耐藥HT9細胞的耐藥基因mdr1錶達，可提高耐藥細胞對薑黃素的敏感性。通過設計閤成靶嚮mdr1基因的shRNA榦擾片段，定嚮剋隆到pSilencer 2．1-U6 neo質粒中，成功構建沉默mdr1基因特異錶達的shRNA錶達載體，電轉染HT9細胞後篩選暘性剋隆擴大培養。採用實時熒光定量PCR、Western blot檢測細胞mdr1基因錶達情況，流式細胞術檢測P-糖蛋白外排泵功能，MTT法和流式細胞技術檢測細胞對藥物敏感性和細胞週期分佈。結果顯示，構建的shRNA錶達載體pU6/shRNA/mdr1轉染HT9細胞後，HT9/pU6/shRNA細胞mdr1 mRNA錶達降低瞭78．84％（P＜0．01），P-糖蛋白的錶達量降低瞭48．27％（P＜0．05），細胞內Rho123相對熒光彊度由10．8％±0.58％升高至73．56％±1．37％；轉染細胞對薑黃素敏感性明顯增彊，IC50由（24．10±0．83）μmol/L降至（5．10±0.14）μmol/L；耐藥相對逆轉率為84．74％±1．86％，與HT9細胞相比，經薑黃素處理的穩定轉染細胞HT9/pU6/shRNA細胞週期阻滯在S、G2/M期。說明質粒介導的shRNA錶達載體pU6/shRNA/mdr1能夠穩定、持久地抑製mdr1基因錶達，能有效增彊HT9細胞對薑黃素的敏感性。
통과pSilencer 2．1질립개도적RNAi기술침묵급성조유립백혈병내약HT9세포적내약기인mdr1표체，가제고내약세포대강황소적민감성。통과설계합성파향mdr1기인적shRNA간우편단，정향극륭도pSilencer 2．1-U6 neo질립중，성공구건침묵mdr1기인특이표체적shRNA표체재체，전전염HT9세포후사선양성극륭확대배양。채용실시형광정량PCR、Western blot검측세포mdr1기인표체정황，류식세포술검측P-당단백외배빙공능，MTT법화류식세포기술검측세포대약물민감성화세포주기분포。결과현시，구건적shRNA표체재체pU6/shRNA/mdr1전염HT9세포후，HT9/pU6/shRNA세포mdr1 mRNA표체강저료78．84％（P＜0．01），P-당단백적표체량강저료48．27％（P＜0．05），세포내Rho123상대형광강도유10．8％±0.58％승고지73．56％±1．37％；전염세포대강황소민감성명현증강，IC50유（24．10±0．83）μmol/L강지（5．10±0.14）μmol/L；내약상대역전솔위84．74％±1．86％，여HT9세포상비，경강황소처리적은정전염세포HT9/pU6/shRNA세포주기조체재S、G2/M기。설명질립개도적shRNA표체재체pU6/shRNA/mdr1능구은정、지구지억제mdr1기인표체，능유효증강HT9세포대강황소적민감성。
