江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2013年
7期
26-29
,共4页
鲁海富%沈文%崔茹鹏%杨文%姜方配%孙延鸣
魯海富%瀋文%崔茹鵬%楊文%薑方配%孫延鳴
로해부%침문%최여붕%양문%강방배%손연명
巴什拜羊%ISG15%克隆表达%活性检测
巴什拜羊%ISG15%剋隆錶達%活性檢測
파십배양%ISG15%극륭표체%활성검측
克隆表达新疆巴什拜羊ISG15基因,并对其表达产物的活性进行检测.利用RT-PCR和RACE技术克隆了巴什拜羊ISG15基因的cDNA全长序列,将ISG15基因克隆至真核表达载体pPIC9K,经电击转化至GSll5中并用甲醇进行诱导表达,用Ni2+螯合亲和层析法对表达的蛋白进行纯化,通过淋巴细胞转化试验来检测表达蛋白的活性.结果表明:克隆得到的巴什拜羊ISG15基因cDNA全长为646 bp,开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸.经酵母重组菌株GS115/pPIC9K-ISG15表达,SDS-PAGE结果显示表达的蛋白约为33 ku,表达的蛋白可用Ni2+螯合亲和层析方法纯化,淋巴细胞增殖试验结果显示,表达的ISG15蛋白能够显著地刺激淋巴细胞增殖(P＜0.05),表明表达的蛋白具有生物学活性.
剋隆錶達新疆巴什拜羊ISG15基因,併對其錶達產物的活性進行檢測.利用RT-PCR和RACE技術剋隆瞭巴什拜羊ISG15基因的cDNA全長序列,將ISG15基因剋隆至真覈錶達載體pPIC9K,經電擊轉化至GSll5中併用甲醇進行誘導錶達,用Ni2+螯閤親和層析法對錶達的蛋白進行純化,通過淋巴細胞轉化試驗來檢測錶達蛋白的活性.結果錶明:剋隆得到的巴什拜羊ISG15基因cDNA全長為646 bp,開放閱讀框為474 bp,編碼157箇氨基痠.經酵母重組菌株GS115/pPIC9K-ISG15錶達,SDS-PAGE結果顯示錶達的蛋白約為33 ku,錶達的蛋白可用Ni2+螯閤親和層析方法純化,淋巴細胞增殖試驗結果顯示,錶達的ISG15蛋白能夠顯著地刺激淋巴細胞增殖(P＜0.05),錶明錶達的蛋白具有生物學活性.
극륭표체신강파십배양ISG15기인,병대기표체산물적활성진행검측.이용RT-PCR화RACE기술극륭료파십배양ISG15기인적cDNA전장서렬,장ISG15기인극륭지진핵표체재체pPIC9K,경전격전화지GSll5중병용갑순진행유도표체,용Ni2+오합친화층석법대표체적단백진행순화,통과림파세포전화시험래검측표체단백적활성.결과표명:극륭득도적파십배양ISG15기인cDNA전장위646 bp,개방열독광위474 bp,편마157개안기산.경효모중조균주GS115/pPIC9K-ISG15표체,SDS-PAGE결과현시표체적단백약위33 ku,표체적단백가용Ni2+오합친화층석방법순화,림파세포증식시험결과현시,표체적ISG15단백능구현저지자격림파세포증식(P＜0.05),표명표체적단백구유생물학활성.
