作物学报
作物學報
작물학보
ACTA AGRONOMICA SINICA
2013年
8期
1352-1359
,共8页
高粱%SbDREB2%原核表达%胁迫处理%荧光定量PCR
高粱%SbDREB2%原覈錶達%脅迫處理%熒光定量PCR
고량%SbDREB2%원핵표체%협박처리%형광정량PCR
Sorghum%SbDREB2%Prokaryotic expression%Abiotic stress%Quantitative real-time PCR
干旱应答元件结合蛋白(DREB)在植物非生物逆境胁迫中调节下游一系列抗逆基因的表达.本研究利用电子克隆和RT-PCR方法从高粱中克隆到1个DREB类基因SbDREB2,该基因ORF 789 bp,推测编码蛋白含262个氨基酸残基,相对分子质量28.6 kD,理论等电点为5.52,在DNA序列内包含1个740 bp的内含子,符合GT-AG剪接规则.氨基酸序列分析表明,该蛋白在82～145区含有DREB类转录因子家族特有的AP2保守结构域,与玉米DREB2A及水稻DREB1蛋白相似度分别为84％和69％.成功构建了原核表达载体pET28a-SbDREB2,经IPTG诱导获得32.5kD左右蛋白,与理论值一致.Real-time PCR表达特性分析显示,该基因为组成型表达,在根、茎、叶中均表达,根中表达量约是茎中的2.5倍;受干旱、高盐和外源ABA的强烈诱导,但对低温几乎没有响应.
榦旱應答元件結閤蛋白(DREB)在植物非生物逆境脅迫中調節下遊一繫列抗逆基因的錶達.本研究利用電子剋隆和RT-PCR方法從高粱中剋隆到1箇DREB類基因SbDREB2,該基因ORF 789 bp,推測編碼蛋白含262箇氨基痠殘基,相對分子質量28.6 kD,理論等電點為5.52,在DNA序列內包含1箇740 bp的內含子,符閤GT-AG剪接規則.氨基痠序列分析錶明,該蛋白在82～145區含有DREB類轉錄因子傢族特有的AP2保守結構域,與玉米DREB2A及水稻DREB1蛋白相似度分彆為84％和69％.成功構建瞭原覈錶達載體pET28a-SbDREB2,經IPTG誘導穫得32.5kD左右蛋白,與理論值一緻.Real-time PCR錶達特性分析顯示,該基因為組成型錶達,在根、莖、葉中均錶達,根中錶達量約是莖中的2.5倍;受榦旱、高鹽和外源ABA的彊烈誘導,但對低溫幾乎沒有響應.
간한응답원건결합단백(DREB)재식물비생물역경협박중조절하유일계렬항역기인적표체.본연구이용전자극륭화RT-PCR방법종고량중극륭도1개DREB류기인SbDREB2,해기인ORF 789 bp,추측편마단백함262개안기산잔기,상대분자질량28.6 kD,이론등전점위5.52,재DNA서렬내포함1개740 bp적내함자,부합GT-AG전접규칙.안기산서렬분석표명,해단백재82～145구함유DREB류전록인자가족특유적AP2보수결구역,여옥미DREB2A급수도DREB1단백상사도분별위84％화69％.성공구건료원핵표체재체pET28a-SbDREB2,경IPTG유도획득32.5kD좌우단백,여이론치일치.Real-time PCR표체특성분석현시,해기인위조성형표체,재근、경、협중균표체,근중표체량약시경중적2.5배;수간한、고염화외원ABA적강렬유도,단대저온궤호몰유향응.
