中华胃肠外科杂志
中華胃腸外科雜誌
중화위장외과잡지
CHINESE JOURNAL OF GASTROINTESTINAL SURGERY
2014年
1期
36-40
,共5页
叶青%黄峰%郑秋红%王晓盈%许扬梅%龚福生%黄丽洁
葉青%黃峰%鄭鞦紅%王曉盈%許颺梅%龔福生%黃麗潔
협청%황봉%정추홍%왕효영%허양매%공복생%황려길
结肠癌细胞%基因,γ-synuclein%侵袭%黏附%人脐静脉内皮细胞
結腸癌細胞%基因,γ-synuclein%侵襲%黏附%人臍靜脈內皮細胞
결장암세포%기인,γ-synuclein%침습%점부%인제정맥내피세포
Colon cancer cells%γ-synuclein%Invasion%Adhesion%Human umbilical vein endothelial cells
目的 构建针对γ-synuclein基因的真核表达载体并观察其对结肠癌细胞SW1116体外侵袭及与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附能力的影响.方法 从结肠癌细胞系HT29提取总RNA,经RT-PCR获得γ-synuclein cDNA全长片段,经过酶切连接等反应定向克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1上,以脂质体转染的方法将重组质粒转染至结肠癌细胞系SW1116,经G418筛选出稳定转染的细胞株.采用Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力.将细胞接种于铺有HUVEC的96孔板中,酶标仪读取荧光强度来表示黏附细胞的相对数.结果 成功构建pEGFP-γ-synuclein真核表达载体,经过筛选后可在SW1116细胞中稳定表达,且能在体外翻译出GFP-γ-synuclein融合蛋白质.转染γ-synuclein后,穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的细胞数明显增加(198.4±20.7比98.8±13.2,P＜0.05),与HUVEC黏附的细胞数(荧光强度)亦显著增加(3.08±0.36比1.22±0.21,P＜0.05).结论 γ-synuclein可显著增强结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能.
目的 構建針對γ-synuclein基因的真覈錶達載體併觀察其對結腸癌細胞SW1116體外侵襲及與人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)黏附能力的影響.方法 從結腸癌細胞繫HT29提取總RNA,經RT-PCR穫得γ-synuclein cDNA全長片段,經過酶切連接等反應定嚮剋隆至真覈綠色熒光蛋白錶達載體pEGFP-C1上,以脂質體轉染的方法將重組質粒轉染至結腸癌細胞繫SW1116,經G418篩選齣穩定轉染的細胞株.採用Transwell小室法檢測細胞體外侵襲能力.將細胞接種于鋪有HUVEC的96孔闆中,酶標儀讀取熒光彊度來錶示黏附細胞的相對數.結果 成功構建pEGFP-γ-synuclein真覈錶達載體,經過篩選後可在SW1116細胞中穩定錶達,且能在體外翻譯齣GFP-γ-synuclein融閤蛋白質.轉染γ-synuclein後,穿過Matrigel膠及Transwell小室膜的細胞數明顯增加(198.4±20.7比98.8±13.2,P＜0.05),與HUVEC黏附的細胞數(熒光彊度)亦顯著增加(3.08±0.36比1.22±0.21,P＜0.05).結論 γ-synuclein可顯著增彊結腸癌細胞SW1116體外侵襲轉移潛能.
목적 구건침대γ-synuclein기인적진핵표체재체병관찰기대결장암세포SW1116체외침습급여인제정맥내피세포(HUVEC)점부능력적영향.방법 종결장암세포계HT29제취총RNA,경RT-PCR획득γ-synuclein cDNA전장편단,경과매절련접등반응정향극륭지진핵록색형광단백표체재체pEGFP-C1상,이지질체전염적방법장중조질립전염지결장암세포계SW1116,경G418사선출은정전염적세포주.채용Transwell소실법검측세포체외침습능력.장세포접충우포유HUVEC적96공판중,매표의독취형광강도래표시점부세포적상대수.결과 성공구건pEGFP-γ-synuclein진핵표체재체,경과사선후가재SW1116세포중은정표체,차능재체외번역출GFP-γ-synuclein융합단백질.전염γ-synuclein후,천과Matrigel효급Transwell소실막적세포수명현증가(198.4±20.7비98.8±13.2,P＜0.05),여HUVEC점부적세포수(형광강도)역현저증가(3.08±0.36비1.22±0.21,P＜0.05).결론 γ-synuclein가현저증강결장암세포SW1116체외침습전이잠능.
